河南省医学科技攻关计划项目(201002006)
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 相关作者：刘帅岳保红张帆贾宇王宁宁更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院河南省人民医院更多>>
- 发文基金：河南省医学科技攻关计划项目国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利妥昔单抗靶向治疗B细胞性非霍奇金淋巴瘤后骨髓中淋巴细胞的免疫表型特点被引量：7
- 2017年
- B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B-cellnon Hodgkin＇s lymphoma,B-NHL）是发病率和死亡率居全世界第5位的恶性肿瘤。免疫治疗、联合化疗使B-NHL的缓解率和生存率等有了大幅度的提高。由于大部分B-NHL可特征性地表达CD20。CD20抗原不会从细胞表面脱落,因此利妥昔单抗（嵌合型CD20单克隆抗体）可用于B-NHL的治疗。
- 刘帅魏园玉李曌博张帆王宁宁李佳岳保红
- 关键词：靶向治疗B细胞性非霍奇金淋巴瘤免疫表型
- 循环骨髓瘤细胞数量与髓内瘤细胞负荷相关性分析及临床意义被引量：6
- 2017年
- 目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者的循环骨髓瘤细胞（CMCs）数量和髓内瘤细胞（MMCs）负荷的相关性以及CMCs与MM预后相关指标的关系，评价CMCs反映骨髓瘤细胞负荷及病情进展的可行性。方法非干预型临床研究。选择2015年7月至2016年10月于郑州大学第一附属医院确诊的82例MM患者，其中男44例，女38例，年龄58（33～78）岁；依据诊断和疗效标准分为初发及复发组35例、部分缓解（PR）组31例和完全缓解（CR）组16例；依据CMCs阳性标准分为CMCs阳性组45例和阴性组37例。筛选本院同期30例非浆细胞相关疾病的贫血患者作为对照组，其中男18例，女12例，年龄53（33～83）岁。应用流式细胞术检测各组的CMCs和MMCs的比例，同时分析MM患者的血红蛋白（Hb）、血浆白蛋白（Alb）、β2微球蛋白（β2-MG）、血清肌酐（sCrea）、血清钙（Ca）、乳酸脱氢酶（LDH）、骨质破坏、肾功能损害、DS分期及ISS分期各预后相关指标。采用Kruskal-Wallis H检验、Mann-Whitney U检验、Spearman秩相关、χ^2检验及Logistic回归进行统计学分析。结果（1）CR组及对照组均未检测出MMCs及CMCs。（2）初发及复发组和PR组的CMCs阳性检出率分别为71.4%、64.5%，两组中CMCs与MMCs比例均呈正相关（P〈0.05）；MMCs和CMCs在初发及复发组的比例均显著高于PR组，在PR组的比例均显著高于CR组和对照组（P〈0.008 3）。（3）与CMCs阴性组相比，CMCs阳性组的中度以上贫血、β2-MG增高、sCrea增高、骨质破坏及肾功能损害的频率明显升高，呈现出较高的DS、ISS分期（P〈0.05）。经多因素Logistic回归分析，中度以上贫血、β2-MG增高是CMCs阳性的独立危险因素（P〈0.05）。结论CMCs可反映MM患者的肿瘤负荷及病情进展；相比MMCs，检测CMCs可以提高患者依从性。中度以上贫血和β2-MG增高是MM患者CMCs存在的独立危险因素。
- 王宁宁李佳张帆李曌博高晓娟刘帅岳保红
- 关键词：多发性骨髓瘤流式细胞术
- HL-60细胞Nucleostemin表达下调对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的影响被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨HL-60白血病细胞中核干细胞因子Nucleostemin(NS)表达下调对其非依赖P53通路的候选途径PI3K/AKT/mTOR中相关蛋白表达是否有影响。方法:采用重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至P53缺失型HL-60细胞中干扰NS的表达。用Western blot技术评价转染后HL-60细胞NS蛋白的表达水平并检测干扰前后PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关蛋白水平的表达变化。结果:重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见到GFP荧光表达较强(<80%)。Western blot结果显示,NS蛋白表达明显下调,干扰表达有效;干扰HL-60细胞中NS的表达后AKT、p-AKT、p70s6k、p-p70s6k蛋白变化不明显(t_1=2.31,P=0.074;t_2=3.62,P=0.069;t_3=1.60,P=0.251;t_4=2.72,P=0.113),而mTOR复合物中的GβL蛋白表达明显下调(t=15.01,P=0.002)。结论:HL-60细胞中NS蛋白可影响mTOR复合物中GβL蛋白的表达,PI3K/AKT/mTOR通路可能为NS非依赖P53作用途径之一。
- 贾宇魏园玉李曌博张帆刘帅岳保红
- 关键词：核干细胞因子HL-60细胞
- 抑制p53缺失和突变型白血病细胞PPP2R5A表达后细胞生物学变化
- 2012年
- 目的探讨在p53缺失和突变型白血病细胞内PPP2R5A表达量的下降与细胞生物学变化之间的关系,为寻找核干细胞因子(NS)的非p53依赖性信号转导通路提供依据。方法利用脂质体转染技术将针对PPP2R5A的siRNA转染到p53缺失或突变型的白血病细胞HL-60、THP-1和Raji细胞内,沉默PPP2R5A基因。RT-PCR法和免疫细胞化学法检测siRNA的转染效果并找出最佳转染浓度和时间。倒置显微镜观察转染组和对照组细胞的生长状态并绘制细胞生长曲线。瑞-吉染色观察转染组和对照组细胞的胞核、染色质及形态改变。流式细胞术AnnexinV/PI双染法进行细胞凋亡分析,PIDNA染色法进行细胞周期测定。结果倒置显微镜观察显示转染后细胞生长状态和形态均出现变化,瑞-吉染色显示转染后细胞有凋亡小体形成。细胞凋亡分析和细胞周期测定显示转染组凋亡细胞百分比率增高,G1期和G2/M期细胞百分比上升,而S期细胞百分比减低,表明细胞增殖减弱。结论抑制p53缺失或突变型白血病细胞PPP2R5A基因后细胞的凋亡、分化有一定变化,提示p53缺失或突变型白血病细胞中PPP2R5A在细胞分化、凋亡调控中扮演一定角色,为验证NS非p53途径的信号通路是否与PPP2R5A有关提供了依据。
- 付书贞孙晓莉Abdallah Dlykan贾宇魏园玉刘帅岳保红
- 关键词：白血病细胞核干细胞因子脂质体转染细胞生物学
- HLA-DR^(neg/low)急性单核细胞白血病的免疫学表型分析被引量：1
- 2016年
- 目的探讨不表达或低比例表达HLA-DR(HLA-DR^(neg/low))急性单核细胞白血病(AML-M5)患者的免疫学表型特征。方法用多参数流式细胞术对111例急性单核细胞白血病(AML-M5)患者的骨髓细胞进行检测,分析其免疫表型。结果流式细胞术结果表明,HLA-DR抗原阴性表达者(HLA-DR^(neg))9例,低表达者(HLA-DR^(low))2例,且均表达CD13和CD33,不表达CD4,而CD34、CD38、CD117、CD15、CD64、CD14和CD56均呈异质性表达;与HLA-DR^(posi)阳性者相比,HLA-DR^(neg)/low者CD4的阳性率差异有统计学意义(P=0.015),其他抗原阳性率的差异均无统计学意义。结论 HLA-DR^(neg/low)的AML-M5患者CD抗原表达异常,多呈HLA-DR^(neg/low)/CD4^(neg)的表型特征,极易被误诊为其他类型的白血病。
- 李曌博张帆王宁宁魏园玉刘帅岳保红
- 关键词：急性单核细胞白血病HLA-DR免疫表型CD4
- 37例CD45阳性的多发性骨髓瘤浆细胞免疫学表型特征被引量：1
- 2017年
- 目的通过分析CD45阳性(CD45^+)多发性骨髓瘤(MM)浆细胞的免疫表型特征及其与CD45阴性(CD45-)MM浆细胞免疫表型的区别,探讨CD45表达与MM临床特征的相关性。方法回顾性分析192例初诊MM患者浆细胞的免疫表型,收集2个组的相关临床信息及实验室数据进行比对研究。结果根据浆细胞CD45的表达情况将192例MM患者分为CD45^+MM组(37例,浆细胞的CD45平均表达荧光强度>102)和CD45-MM组(155例)。CD45^+MM组浆细胞CD138、CD38、CD19、CD56、CD20、CD71、CD117、CD33的阳性率分别为83.8%、97.3%、32.4%、64.9%、21.6%、51.4%、35.1%、24.3%;胞浆κ轻链和λ轻链的阳性率均为45.9%,有8.2%不表达轻链。2个组浆细胞CD19、CD71和CD138的阳性率差异有统计学意义(P<0.05);其他抗原的阳性率及胞浆轻链的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CD45^+MM患者浆细胞CD19和CD71阳性率明显升高,而CD138阳性率明显降低,推测其分化阶段可能处于浆细胞的偏早期。
- 刘帅李曌博张帆王宁宁岳保红
- 关键词：CD45免疫表型多发性骨髓瘤
- 核干细胞因子RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的构建核干细胞因子基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体并对其在白血病细胞株中的干扰效果进行鉴定,为后期研究奠定基础。方法针对核干细胞因子基因的序列设计RNAi有效靶点,合成含RNA干扰序列、Loop环、AgeⅠ和EcoRⅠ酶切位点,以及终止信号的单链DNA oligo,经退火形成双链DNA,与双酶切线性化的带有GFP荧光标记和嘌呤霉素抗性标记的GV248慢病毒空载体进行连接产生重组慢病毒载体,转化感受态细菌,挑取重组阳性转化子进行菌落PCR反应,并对PCR阳性克隆进行测序。将重组慢病毒载体及其两种辅助包装原件载体质粒pHelper1.0和pHelper2.0共转染293T细胞进行病毒的包装,收集、浓缩病毒液后测定其滴度,并转染HL-60、NB4以及K562等三种人白血病细胞株,倒置荧光显微镜下观察其转染效率,real-time PCR检测核干细胞因子基因的敲减效率。结果经测序证实正确构建出了核干细胞因子基因的RNAi重组慢病毒载体,包装、浓缩后其滴度为4×108TU/ml,荧光显微镜下显示其能有效转染进入HL-60、NB4及K562等白血病细胞株中,转染效率均在80%以上;real-time PCR显示转染后核干细胞因子基因mRNA表达水平较阴性对照组显著下降(P<0.05),在HL-60、NB4和K562细胞中核干细胞因子基因的抑制效率分别为52.3%、80.5%、62.3%。结论成功构建出了核干细胞因子基因的RNAi慢病毒载体,其能有效干扰人白血病细胞株HL-60、NB4及K562中的核干细胞因子基因表达。
- 孙晓莉Abdallah Dlykan贾宇魏园玉刘帅岳保红
- 关键词：RNA干扰核干细胞因子慢病毒载体白血病细胞
- HL-60细胞Nucleostemin表达下调对PI3K/AKT/mTOR通路相关分子的影响被引量：3
- 2014年
- 本研究旨在探讨白血病细胞中nucleostemin(NS)基因下调对其非依赖p53通路的候选途径PI3K/AKT/mTOR的相关分子表达的影响。通过重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至p53缺失型HL-60细胞以干扰NS基因的表达。用Real-time PCR技术评价转染后HL-60细胞NS基因的表达情况并检测干扰前后PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关分子水平表达的变化。结果表明:重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见GFP荧光水平较高,大于80%。Real-time PCR结果显示,NS基因mRNA的抑制率在HL-60细胞中为56.5%;干扰NS的表达后PI3K、AKT和GβL基因mRNA表达量分别为0.491±0.084、0.398±0.164、0.472±0.097,下调明显,与空白对照组(分别为1.002±0.171、1.000±0.411、1.001±0.206)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在HL-60细胞中PI3K/AKT/mTOR通路相关分子的变化与NS基因的下调呈正相关,两者的关联性为证明PI3K/AKT/mTOR信号通路可能是NS的一种非依赖p53作用途径提供了依据。
- 贾宇魏园玉张帆李曌博刘帅岳保红
- 关键词：NUCLEOSTEMINMTOR信号通路HL-60细胞
- 流式细胞术分析骨髓增生异常综合征小巨核细胞的初步研究被引量：5
- 2016年
- 目的建立基于巨核细胞糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（CD41a）和碘化丙啶（PI）双标记的流式细胞术（FCM）分析骨髓小巨核细胞的方法,并研究其在骨髓增生异常综合征（MDS）诊断中的意义。方法采用异硫氰酸荧光素标记的单克隆抗体标记CD41a,PI标记巨核细胞DNA,用FCM分析巨核细胞倍体分布。结果 42例MDS患者,FCM检测小巨核细胞阳性率为90.5%,瑞氏-姬姆萨染色和免疫组织化学方法检测阳性率分别为54.8%和64.3%,三者比较差异有统计学意义（χ~2=13.640,P=0.001）;FCM检测MDS低危组和高危组小巨核细胞阳性率分别为81.8%和100%,差异有统计学意义（χ~2=4.019,P=0.045）。结论 FCM检测MDS小巨核细胞检出率高,且高危患者小巨核细胞检出率更高,有助于MDS的早期诊断和预后评估。
- 刘帅曹征张晓飐岳保红
- 关键词：流式细胞术骨髓增生异常综合征巨核细胞DNA倍体
