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miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达被引量：2: 2014年; 目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。; 刘萃萃王璐璐赵卫卫彭攸王玉平孙振亮冯景; 关键词：乳腺癌 EZH2 EZH2

MiR-217对乳腺癌上皮细胞甲基化关键基因调控作用的研究: 目的:探讨在人乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1与EZH2 3UTR调控DNMT1及EZH2转录后表达水平,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法::首先利用实时定量PCR技术,检测HBL-1...; 王璐璐冯景; 关键词：DNMT1基因 EZH2基因 MCF-7 MDA-MB-231

人EZH2基因编码区及3'非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体构建及其在293T细胞中的表达被引量：4: 2012年; 目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用In-Fusion定向克隆技术构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体,测序无误后抽提质粒,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。Western blot检测mCherry-EZH2的表达。结果测序证实重组慢病毒表达载体基因序列完全正确;病毒颗粒包装成功,滴度为1.59×109IU/ml;Western blot检测293T细胞中可以表达mCherry-EZH2融合蛋白。结论成功构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体及病毒,其mCherry-EZH2可以在293T细胞中稳定表达。为进一步分析可能调控EZH2基因CDS区及3'UTR表达的miRNA奠定前期实验基础。; 彭攸赵卫卫李晓娇王玉平卢晓佳邬美玉冯景; 关键词：EZH2基因红色荧光蛋白

人乳腺癌上皮细胞miR-217对EZH2表达的调控作用: 2013年; 目的验证乳腺癌上皮细胞中miR-217是否通过直接作用于homolog2 zeste基因增强子(EZH2)3'UTR调控EZH2表达。方法利用RT-PCR技术检测人正常乳腺上皮细胞系HBL-100及乳腺癌上皮细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞株中的miR-217,在低表达miR-217细胞株中转染miR-217模拟物(miR-217 minics),在高表达miR-217细胞株中转染miR-217抑制剂(miR-217 inhibitor);Western blot法检测各实验细胞中的EZH2蛋白。用含有miR-217野生型及突变型识别位点的EZH2 3'UTR载体(UTREZH2-UTR-WT和EZH2-UTR-MUT)质粒分别转染人胚肾细胞293T,检测其相对荧光素酶活性。结果 miR-217在MDA-MB-231细胞中低表达,转染miR-217 minics后,其EZH2蛋白表达下降;miR-217在HBL-100中高表达,转染miR-217 inhibitor后,其EZH2蛋白表达增高。人胚肾细胞293T中EZH2-UTR-WT的相对荧光素酶活性低于EZH2-UTR-MUT,两者相比,P<0.05。结论在乳腺癌上皮细胞中,miR-217对EZH2的表达具有调控作用,且miR-217通过直接靶向EZH2 3'UTR调控EZH2表达。; 王璐璐刘萃萃郭腾陶然彭攸赵卫卫王玉平孙振亮冯景

人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究被引量：1: 2013年; 目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变。结果过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达。; 王璐璐刘萃萃郭腾陶然彭攸赵卫卫王玉平孙振亮冯景; 关键词：DNMT1 MCF-7 MDA-MB-231

MiR-217对乳腺癌上皮细胞甲基化关键基因调控作用的研究: 目的:探讨在人乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1与EZH2 3UTR调控DNMT1及EZH2转录后表达水平,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法::首先利用实时定量PCR技术,检测HBL-1...; 王璐璐冯景; 关键词：DNMT1基因 EZH2基因 MCF-7 MDA-MB-231; 文献传递

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国家自然科学基金(81202104)