河南省教育厅自然科学基金(2011A180022)
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
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- 怀地黄新基因RgVP的克隆与序列特征分析
- 液泡质子泵焦磷酸水解酶(V-PPase)是植物生长和耐非生物胁迫过程中的关键酶。本研究基于5种已知植物ARGOS基因碱基序列的保守区,设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术获得一个495bp怀地黄cDNA序列。经过...
- 周延清张永华陈艳梅张喻李静云陈娟娟
- 关键词：怀地黄RACE
- 文献传递
- 怀地黄3-酮酯酰CoA-硫解酶基因的克隆、序列特征和时空表达分析被引量：16
- 2013年
- 目的对怀地黄3-酮酯酰CoA-硫解酶(Rehmannia glutinosa f.hueichingensis 3-ketoacyl CoA-thiolase,RghKAT)cDNA全长基因进行克隆及分析,为怀地黄分子育种提供候选基因和理论依据。方法根据其他植物ARGOS基因序列的保守结构域设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,获得RghKAT cDNA全长序列;通过生物信息学技术对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比对;利用实时荧光定量PCR技术检测了其在2个时期、10个组织的表达。结果 RghKAT基因全长1 713 bp,包含了1 395 bp的开放阅读框(ORF),编码464个氨基酸;同源比对和系统进化分析表明,RghKAT的核苷酸序列与葡萄、番茄、毛果杨、拟南芥和小麦的KAT核苷酸序列同源性分别达84%、82%、82%、79%、73%;RghKAT编码的氨基酸序列与矮牵牛、葡萄、黄瓜、拟南芥和小麦的KAT氨基酸同源性分别为88%、88%、86%、87%、78%;各物种KAT酶进化树符合物种进化规律;理化性质表明该蛋白为略成碱性的稳定蛋白质,蛋白质二级结构主要由α-螺旋、不规则卷曲、β-折叠和β-转角构成;在N端存在一个由70个氨基酸残基组成的信号肽;RghKAT蛋白三维结构具有硫解酶典型的特征序列;表达谱分析表明,RghKATmRNA在各时期、各组织中均有表达,盛花期花瓣中表达最强,而在幼苗期叶中表达量最低。结论成功克隆了RghKAT cDNA全长序列,具有KAT基因的结构特性及其产物硫解酶典型的特征序列,其在盛花期花瓣中表达量最高。
- 周延清张永华张喻陈艳梅白妍妍魏海方段红英周春娥
- 关键词：怀地黄生物信息学分析蛋白质二级结构
- DNA分子标记技术在四大怀药研究中的应用概况被引量：3
- 2012年
- DNA分子标记技术是比形态标记、细胞标记和生化标记理想的遗传标记技术,已经广泛应用于动植物和微生物的诸多研究中。但是它在四大怀药中的应用相对较少。因此,对几种DNA分子标记技术在四大怀药的遗传多样性、指纹图谱、居群遗传结构、品种鉴定和真伪品鉴别等方面的研究成果和新进展进行了综述,以期为四大怀药的深入研究提供参考。
- 周延清周鹏郭静佩张永华陈艳梅张喻杨德勇许春
- 关键词：DNA分子标记指纹图谱
- 怀地黄基因片段及其中转座酶基因的克隆与序列分析被引量：6
- 2012年
- 根据已知裂叶牵牛花PNZIP启动子碱基序列的相关信息设计引物,采用PCR方法,从怀地黄基因组中扩增出5个基因片段,回收和克隆出其中一个1 096bp的基因片段。经过NCBI对比分析,发现它是一个类似转座子的相关蛋白基因序列,含有一个完整的开放阅读框,大小为450bp,编码由150个氨基酸组成的转座酶。然后,基于该开放阅读框的碱基序列,设计另一对引物,用PCR方法,从中扩增出该完整开放阅读框的序列片段。
- 周延清姚换灵段红英周春娥张永华陈艳梅张喻
- 关键词：怀地黄基因克隆开放阅读框
- 怀地黄液泡质子泵焦磷酸水解酶基因的克隆与生物信息学分析被引量：6
- 2013年
- 为了克隆地黄功能基因,根据NCBI GenBank核酸数据库中5种已知植物生长素诱导的器官膨大基因(ARGOS)碱基序列的保守区,利用CLUSTAL 2.1和DNAMAN 4.0软件设计简并引物,采用RT-PCR技术扩增出一个cDNA片段,测序表明,获得基因cDNA片段序列长度为495bp。经过NCBI数据库BLAST分析,发现它与莲花、蓖麻、烟草、苜蓿、葡萄、碧桃、灰绿藜7种植物的液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因同源性很高,在83%～86%,因此获得的基因是地黄液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因。
- 周延清张永华陈艳梅张喻李静云陈娟娟白妍妍魏海方
- 关键词：怀地黄生物信息学分析
- 发根农杆菌T-DNA诱变怀地黄突变体或品系的遗传学分析被引量：1
- 2013年
- 主要采用紫外吸收光谱法、高效液相色谱法、3,5-二硝基水杨酸比色法,PCR和SRAP技术,从叶绿素含量、还原糖和总糖含量、梓醇含量、毛蕊花糖苷含量和T-DNA片段的稳定性和基因组DNA的变化方面,对发根农杆菌转化怀地黄突变体或品系的变异性状进行了分析.发现怀地黄突变体或品系的叶片形态、植高、叶绿素含量、糖含量、梓醇和毛蕊花糖苷的含量均有变异,一个SRAP引物组合从其基因组DNA中扩增出一个对照中没有的约400bp的DNA片段,T1-T7代突变体或品系中均检测到rolB基因的存在.这些结果表明发根农杆菌T-DNA可以诱导怀地黄产生变异,并且稳定遗传.
- 范红军姚换灵张永华周延清张喻李静云陈娟娟
- 关键词：怀地黄发根农杆菌突变体SRAP
