国家自然科学基金(30540067)
- 作品数：3 被引量：20H指数：3
- 相关作者：薛乐勋刘红涛柴玉荣田芳曲东京更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 杜氏盐藻rbcS启动子的克隆和功能分析被引量：9
- 2008年
- 为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因rbcS的5′上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用DraI、EcoR V、PvuII和StuI4种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建基因组步行文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4;设计特异引物从这4种文库中扩增rbcS基因的5′上游调控序列。在GWL1、GWL4中分别扩增出约1.2kb的片段。对该序列的分析表明,它的3′端与已知盐藻rbcScDNA的5′端序列完全一致,说明是该基因的5′端上游区,并且包含多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box,CAAT-box),富含GT的重复序列。此序列EcoR I下游的片段与除草剂抗性基因bar相融合,构建表达载体,电击法转化盐藻。通过对转化藻株的抗性筛选以及PCR和Southern blot检测,表明该区域能驱动外源基因bar在转基因盐藻中的表达,推断是盐藻rbcS基因的启动子调控区。
- 柴玉荣田芳刘红涛李杰薛乐勋
- 关键词：盐藻RBCS启动子
- 杜氏盐藻RuBisCO小亚基基因的克隆和分析被引量：5
- 2008年
- 根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、团藻(Volvox carteri)、伞藻(Acetabularia cliftonii)等生物的1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)的小亚基rbcS基因氨基酸的高度保守序列,设计一对简并引物,进行RT-PCR.209bp的PCR产物经测序分析及进行氨基酸序列同源性比对,表明克隆的序列为盐藻rbcS基因的cDNA片段.根据该序列信息,采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)的方法扩增其5′上游未知区和3′下游未知区.5′RACE得到的cDNA长度为约300bp,3′RACE得到的长度约380bp.三段序列拼接后cDNA全长为878bp,其中开放读码框包括190个氨基酸.此cDNA序列,推导成氨基酸序列与已知物种的rbcS基因相比对,同源性分别为V.carteri78%,C.reinhardtii75%,A.cliftonii67%,据此可推断所克隆的序列为盐藻RuBisCO的小亚基cDNA序列,GenBank收录号为AY739272.
- 柴玉荣刘国红刘红涛李杰薛乐勋
- 关键词：盐藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶加氧酶RBCS
- 杜氏盐藻完整叶绿体的分离及其蛋白提取被引量：7
- 2008年
- 应用高压破碎及蔗糖密度梯度离心的方法,分离出杜氏盐藻的完整叶绿体,随后用冻融法和研磨法分别提取叶绿体蛋白,并通过蛋白定量和SDS-PAGE凝胶电泳对两种蛋白提取方法进行比较,确立了一套适用于杜氏盐藻叶绿体分离和蛋白提取、定量以及电泳的方法。结果表明:用高压破碎结合蔗糖密度梯度离心的方法能够获得完整且较纯的盐藻细胞叶绿体;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,冻融法提取叶绿体蛋白效率高,电泳条带清晰,蛋白数量较多,蛋白齐全。为下一步在亚细胞水平进行杜氏盐藻耐盐机制的蛋白组学研究奠定了基础。
- 贾岩龙柴玉荣曲东京刘红涛薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻叶绿体蛋白提取
