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排序方式：

应用酵母双杂交技术筛选与RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白: 2012年; 目的:应用酵母双杂交技术筛选小鼠巨噬细胞中与核因子κB受体激活因子(RANK)蛋白上新基序IVVY相互作用的蛋白,以探寻RANKL/RANK系统中介导破骨细胞形成的RANK下游新信号转导蛋白。方法:应用GAL4酵母双杂交系统3,构建仅包含编码新基序535IVVY538的一小段RANK的cDNA片段为诱饵质粒pGBKT7-IVVY,并与巨噬细胞cDNA文库质粒pGADT7-library共转化AH109酵母,筛选与RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白,通过回复性杂交实验验证其可靠性,并对阳性克隆进行测序和基因同源性分析。结果:筛选出4个可能与IVVY基序有相互作用的蛋白,包括Ring1和YY1结合蛋白(RYBP)、ATP结合盒、E2F转录因子和热休克蛋白8,其中表达RYBP的阳性克隆出现频率高、速度快。结论:应用酵母双杂交技术成功地筛选出4个可能与IVVY基序相互作用的候选蛋白,其中RYBP可能性最大。; 王顺清钟雯婷邓晖毛平许艳丽; 关键词：酵母双杂交相互作用蛋白质

RYBP在急性白血病中的表达被引量：8: 2011年; 目的:观察RYBP(Ring1 and YY1-binding protein)在急性白血病中的表达情况,初步探索其在急性白血病中的临床意义。方法:应用蛋白质免疫印迹(western blot)技术分别检测急性单核细胞白血病细胞株SHI-1、急性早幼粒白血病细胞株HL-60、慢性粒细胞白血病细胞株K562、51例初治急性白血病(AL)患者、23例急性白血病完全缓解(ALCR)患者和21例对照(非恶性血液病)患者骨髓单个核细胞中RYBP的表达情况。结果:SHI-1、HL-60及K562细胞株RYBP表达均为强阳性;21例阴性对照中RYBP表达均为阴性。AL组RYBP表达阳性率为73%,ALCR组阳性率为13%,AL组RYBP表达阳性率及表达量比ALCR组及对照组明显增高(P<0.05)。结论:RYBP在急性白血病细胞中表达水平异常增高,提示RYBP可能与急性白血病密切相关。; 钟雯婷王顺清张玉平许艳丽应逸; 关键词：白血病

RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建被引量：2: 2012年; 目的利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术，建立RYBP基因稳定沉默的HL．60细胞系。方法设计针对RYBP基因的5条短发夹状RNA（shRNA）序列，构建RYBPshRNA慢病毒重组载体，分别包装成慢病毒颗粒，直接感染HL-60细胞，同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组。通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率，经嘌呤霉素（终质量浓度8μg／ml）筛选出稳定感染细胞。Westernblot实验初步鉴定出蛋白水平最低的RYBPshRNA组，用实时定量聚合酶链反应（PCR）进一步检测该组细胞mRNA表达水平。结果慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功，与对照组比较，5条RYBPshRNA组细胞RYBP表达均有不同程度减低（P〈0．01），其中以shRNA2沉默效果最佳，且shRNA2组的RYBP基因mRNA水平降低了95％以上（P〈0．05）。结论慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默RYBP基因的表达，成功构建了RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系。; 周家砚邓晖王春丽张玉平应逸许艳丽王顺清; 关键词：短发夹状RNA HL-60细胞慢病毒属 RNA干扰

小鼠巨噬细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定被引量：4: 2010年; 目的采用Gateway技术构建适合酵母表达的小鼠巨噬细胞cDNA文库并进行鉴定。方法将小鼠巨噬细胞的mRNA分离纯化后，以生物素标记的寡聚胸苷酸Oligo（dT）为引物反转录后连接attB衔接子（attBAdapter），层析柱纯化，通过BP重组反应将500bp以上的片段克隆到含attP衔接子的pDONR^TM222载体，电转化人ElectroMAX^TMDHIOB^TM T1 Phage Resistant Cells，构建Gateway入门cDNA文库，并完全随机挑取单菌落，提取质粒酶切鉴定重组子插入片段大小。构建Gateway目的载体，通过LR重组反应将入门文库转入此目的载体成为酵母表达文库，挑取单克隆鉴定重组子插入片段大小。结果经鉴定，入门文库平均滴度为（6．80±0．10）×10^5cfu／ml，文库总容量为7．48×10^6cfu，平均插入片段为（2．20±0．20）kb，重组率为100％。酵母表达文库平均滴度为（3．24±0．10）×10^6cfu／ml，文库总容量为3．89×10^7cfu，平均插入的片段为（2．27±0．15）kb，重组率为95．83％（23／24）。结论构建的小鼠巨噬细胞cDNA入门文库和酵母表达文库都符合高质量文库的要求，可用于进一步的研究。; 王顺清林蔡弟毛平张玉平许艳丽; 关键词：巨噬细胞基因文库 GATEWAY技术酵母菌

shRNA沉默RYBP基因表达对HL-60细胞增殖和凋亡的影响被引量：1: 2012年; Ring和YY1结合蛋白（RYBP）是生物进化过程中高度保守的转录抑制因子，目前认为是多梳（Polycombgroup，PcG）蛋白家族成员，与白血病、淋巴瘤、宫颈癌等肿瘤的发生、发展和预后密切相关。我们在前期实验中发现白血病患者骨髓单个核细胞（MNC）和白血病细胞系HL-60、SHI．1和K562细胞明显地高表达RYBP，且慢性髓性白血病（CML）患者治疗达到完全缓解时骨髓MNCRYBP表达量明显下降，复发时再升高。说明RYBP基因的表达异常与白血病的发生、预后等有关。我们试图通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默HL-60细胞RYBP表达，观察HL-60细胞增殖与凋亡，进一步探讨RYBP在白血病发生发展中的作用。; 王春丽邓晖张玉平应逸许艳丽王顺清; 关键词：HL-60细胞增殖 RNA沉默基因表达细胞系HL-60 慢性髓性白血病

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国家自然科学基金(30871101)