浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金(2009QN002)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：沈琳杨珺孙琦张小贤富梦楚更多>>
- 相关机构：杭州医学院杭州市第三人民医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 梅毒螺旋体外膜蛋白Tp0136的制备及在血清学诊断中的应用被引量：2
- 2011年
- 目的:为探索梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,Tp)外膜蛋白Tp0136在早期梅毒诊断中的价值,利用基因重组技术制备Tp0136蛋白,用于血清抗体的检测。方法:采用PCR扩增Tp0136基因,构建不含信号肽序列的Tp0136基因原核表达载体,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,镍离子亲和凝胶分子筛二步法纯化目的蛋白,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以rTp0136为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体。结果:重组工程菌包涵体形式表达相对分子质量约为46 KDa的rTp0136,表达率为15%,制备得到纯度大于98%的rTp0136。纯化的rTp0136能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1:32。Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为75.1%。结论:重组Tp0136具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景。
- 王磊阳陈政卓富梦楚何君梅李婷婷沈琳杨珺
- 关键词：梅毒螺旋体纯化免疫活性
- 梅毒螺旋体Tp0136活性肽段的可溶性表达、纯化及鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的 筛选梅毒螺旋体特异性抗原Tp0136的活性肽段,可溶性表达和纯化该肽段,并鉴定其免疫活性,探索Tp0136活性肽段在早期梅毒诊断中的价值.方法 通过生物信息学方法对Tp0136亲水性、B细胞表位和二级结构等进行分析,筛选出Tp0136活性肽段（Tp0136B）替代全蛋白.将Tp0136B基因插入到pET22b（＋）上,在E.coli BL21中表达.镍离子亲和色谱纯化表达产物,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以重组Tp0136B蛋白为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体.结果 重组工程菌可溶性表达相对分子质量约为28×103的rTp0136B,表达率为21%,制备得到纯度大于98%的rTp0136B.纯化的rTp0136B能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1：16.Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为85.5%.结论 重组表达的Tp0136活性肽段具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景.
- 杨珺沈琳张小贤孙琦
- 关键词：梅毒螺旋体可溶性表达免疫活性
