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分子信标荧光定量PCR检测结核分枝杆菌的反应体系优化方法对比研究被引量：1: 2010年; 目的建立分子信标荧光定量PCR检测结核分技杆菌的最佳反应体系，探讨影响分子信标荧光定量PCR扩增结果的多个因素。方法利用单因素法和正交实验法，从MgCl2，引物，分子信标探针，dNTP，Taq DNA聚合酶5种因素对分子信标荧光定量PCR反应体系进行优化，并对这两种方法所得的最优体系进行比较。结果单因素法得到的最优反应体系（25μl）为：4mmol／L MgCl2，上、下游引物各0．3μmol／L，分子信标探针0．1μmol／L，200μmol／L dNTP，2U Taq DNA；正交法得到的最优反应体系（25μl）为：6mmol／L MgCl2，上、下游引物各0．2μmol／L，分子信标探针0．1μmol／L，100μmol／L dNTP，3U Taq DNA聚合酶，正交法得到的最优反应体系的荧光定量PCR扩增曲线形状更好，Q值较小，△Rn较大。结论采用正交法得到的荧光定量PCR反应体系优于单因素法，进行实时荧光定量PCR反应体系优化时，正交实验设计是一条科学、可靠、高效、快捷的途径。; 陆巧荣方梅洪志强余志祥胡朝友; 关键词：结核分枝杆菌正交法

分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用被引量：14: 2010年; 目的建立结核分枝杆菌的分子信标荧光定量PCR检测方法,探讨该方法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法针对结核分枝杆菌Ag85BDNA特异保守序列设计引物和分子信标探针,并构建标准品。采用分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法检测158例肺结核患者痰液标本,比较3种方法的检出率。结果所建立方法最低检测限度为2个基因拷贝/反应,在2×102～2×108基因拷贝/mL范围内,Ct值同DNA量的对数呈线性关系。该方法检测5株非分枝杆菌和6株非结核分枝杆菌结果均为阴性,检测结核分枝杆菌H37Rv出现75 bp特异条带。分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法阳性检出率分别为60.13%、16.46%、31.01%,荧光定量PCR法检出率明显高于抗酸染色法和集菌培养法。结论分子信标荧光定量PCR法具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的诊断有一定的临床意义。; 方梅陆巧荣洪志强; 关键词：结核分枝杆菌分子信标荧光定量PCR

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江苏省卫生厅预防医学科研基金(Y2006028)