国家自然科学基金(30570693)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响被引量：1
- 2009年
- 目的构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响。方法PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒。EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶将目的基因片段和载体连接。电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌。厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24h,MTT比色法测定细胞存活率。结果PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达。与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01)。结论成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖。
- 毛淑华姬玲玲刘洪徐一洲黄煌黄英易成
- 关键词：婴儿双歧杆菌抗血管生成可溶性血管内皮生长因子受体血管内皮细胞
- sKDR真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的研究获取可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)基因构建sKDR的真核表达载体,观察sKDR对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响。方法提取HUVECs总RNA,利用RT-PCR方法扩增KDR胞外免疫球蛋白1～3区基因片段,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1中,测序鉴定基因序列正确后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-sKDR转染Lewis肺癌细胞;采用RT-PCR和SDS-PAGE方法检测sKDR在基因和蛋白水平上的表达情况;将转染重组质粒的细胞上清液加至血管内皮生长因子(VEGF)诱导的HUVECs培养基中,采用MTT法检测转染细胞上清液对VEGF诱导的HUVECs增殖的影响。结果经酶切鉴定及基因测序证实成功获得了重组质粒pcDNA3.1-sKDR;重组质粒成功转染Lewis肺癌细胞,经RT-PCR和SDS-PAGE方法证实sKDR在基因和蛋白水平上均获得了成功表达;转染的含sKDR的Lewis肺癌细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sKDR,sKDR在真核系统中获得了有效表达,且表达的蛋白对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖有明显抑制作用。
- 刘洪毛淑华邓丽聪姬玲玲徐一洲黄英
- 关键词：抗血管生成真核表达内皮细胞
- 可溶性血管内皮生长因子受体1真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响被引量：2
- 2010年
- 本研究旨在构建可溶性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体1(soluble fmslike tyosine kinase-1,sFlt-1)的真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,并观察sFlt-1对血管内皮细胞增殖的影响。提取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)总RNA,扩增Flt-1基因胞外1-3结构域,构建真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,测序鉴定基因序列。将重组质粒转染Lewis肺癌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE检测sFlt-1在基因及蛋白水平的表达情况。MTT法检测sFlt-1对VEGF诱导的HUVECs生长的影响。结果显示:①插入片段序列正确;②sFlt-1在基因水平成功表达且转染后的Lewis肺癌细胞能分泌表达sFlt-1;③含sFlt-1的细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。本研究成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,sFlt-1,在基因和蛋白水平均获得有效表达,且表达的蛋白可明显抑制由VEGF诱导的血管内皮细胞增殖。
- 姬玲玲毛淑华刘洪许士叶杨雨易成黄英
- 关键词：血管内皮生长因子可溶性血管内皮生长因子受体1内皮细胞真核表达抗血管生成
- 婴儿双歧杆菌介导的sFlt-1真核表达系统对Lewis肺癌小鼠的抑瘤效果
- 2011年
- 目的观察婴儿双歧杆菌介导的sFlt-1真核表达系统对Lewis肺癌(LLC)小鼠的抑瘤效果。方法将24只C57BL/6LLC小鼠随机分为pcDNA3.1婴儿双歧杆菌组(A组)、pcDNA3.1-sFlt-1重组婴儿双歧杆菌组(B组)及生理盐水对照组(C组)。观察小鼠的生存质量、肿瘤体积、肿瘤重量及抑瘤率,并取血、肿瘤组织及其他组织进行厌氧培养;另取45只荷瘤鼠观察生存率。结果 B组小鼠的肿瘤体积及重量明显小于A、C组,抑瘤率明显高于A组;A、B组的肿瘤组织厌氧培养时可见大量白色菌落生长,其他组织未见菌落生长,血培养仅见几个菌落生长。B组小鼠的存活率及生存质量明显优于A、C组。结论婴儿双歧杆菌介导的sFlt-1真核表达系统可明显抑制肿瘤生长、显著提高荷瘤鼠的存活率,具有良好的安全性及肿瘤靶向性。
- 邓丽聪许士叶毛淑华易成黄英
- 关键词：SFLT-1婴儿双歧杆菌抑瘤
