四川省自然科学基金(2008JY0080-1)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：成都医学院成都医学院第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 系统性红斑狼疮患者B细胞激活后FcγRⅡb1向脂筏信号域转移减少被引量：1
- 2014年
- 目的观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞激活后FcγRⅡb1信号分子向脂筏信号域转移的改变。方法收集SLE患者和正常人外周血并分离出B细胞,分别用抗人μ链的F(ab’)2片段[F(ab’)2anti-μ]单独刺激B细胞抗原受体(BCR),或用抗人μ链的完整IgG(IgG anti-μ)激活B细胞、同时实现BCR与FcγRⅡb1的交联;采用密度梯度超速离心法提取B细胞膜脂筏;免疫沉淀及Western blot法分别检测膜脂筏中FcγRⅡb1的分布、脂筏FcγRⅡb1酪氨酸残基磷酸化水平、及脂筏FcγRⅡb1对含SH2结构域的肌醇磷酸酶(SHIP)的招募。结果 SLE患者B细胞经F(ab’)2anti-μ单独刺激BCR后,胞膜脂筏部位FcγRⅡb1的分布、脂筏FcγRⅡb1酪氨酸残基磷酸化水平、以及脂筏FcγRⅡb1对SHIP的招募,与正常对照组比较均无明显改变,但经IgG anti-μ激活B细胞以实现BCR与FcγRⅡb1的交联后,以上指标均显著低于正常对照组。结论 SLE患者B细胞经IgG anti-μ激活后,转移至膜脂筏部位的FcγRⅡb1、脂筏FcγRⅡb1酪氨酸残基磷酸化水平、以及脂筏FcγRⅡb1对SHIP的招募均显著减少。
- 彭克军郑崛村金家贵王秋林
- 关键词：SLEFCΓ磷酸化酪氨酸SHIP
- 转染FcγRⅡb1基因纠正SLE患者B细胞的过度活化被引量：1
- 2014年
- 目的观察转染FcγRⅡb1基因能否纠正SLE患者B细胞的过度活化。方法构建人FcγRⅡb1基因真核载体,通过电穿孔转染SLE患者B细胞。分别采用抗人μ链的F(ab’)2片段[F(ab’)2anti-μ]和抗人μ链的完整IgG(IgG anti-μ)2种抗体刺激B细胞,同时以正常人B细胞作对照。采用分光光度计检测激活B细胞胞内[Ca2+]i反应,3H-TdR掺入法检测B细胞的增殖能力,ELISA法检测B细胞分泌抗体的功能。结果分别以F(ab’)2anti-μ和IgG anti-μ激活SLE患者B细胞后,细胞内[Ca2+]i反应、cmp值及IgG分泌量的比值均显著低于正常人(P<0.01),通过转染FcγRⅡb1基因后,这些比值均显著提高(P<0.01或P<0.05)。结论转染FcγRⅡb1基因能有效纠正SLE患者B细胞过度的活化、增殖及抗体分泌。
- 彭克军郑崛村张庆莲金家贵段佳慧王秋林
- 关键词：B细胞
- 人FcγR Ⅱ b1基因真核载体的构建、表达及其对B细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的构建人FcγRⅡb1基因的真核表达载体并转染人B细胞,观察其在B细胞的表达及其对细胞增殖的影响。方法分离健康人外周血B细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA,采用PCR技术扩增出含有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的人FcγRⅡb1基因片段,将双酶切产物通过T4 DNA连接酶定向插入pIRES2-EG FP真核载体相应位点中,经酶切及双向测序鉴定其序列的正确性。通过电穿孔法将pIRES2-EGFP-FcγRⅡb1重组载体转入人B细胞中,采用荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率及细胞表面FcγRⅡb1分子的表达水平,采用3H-TdR掺入法检测转染FcγRⅡb1基因对B细胞增殖能力的影响。结果酶切及测序鉴定pIRE S2-EGFP-FcγRⅡb1重组质粒基因序列完全正确,重组质粒转染细胞的效率为15.5%,转染细胞表面FcγRⅡb1分子的表达水平显著增高,并显著抑制了B细胞增殖能力。结论成功构建了pIRES2-EGFP-FcγRⅡb1真核表达载体,并赋予了FcγRⅡb1分子发挥免疫抑制功能的作用。
- 彭克军郑崛村张庆莲段佳慧金家贵王秋林
- 关键词：真核载体B细胞
