国家自然科学基金(30400430)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王燕孙学军禄韶英周培华张伟更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5HRE强化的肝癌靶向性自杀基因载体的构建被引量：4
- 2007年
- 目的设计并构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和甲胎蛋白启动子(AFPp)联合调控的自杀基因硝基还原酶(NTR)真核表达载体。方法设计引物作重叠PCR从大肠杆菌中克隆融合有6个组胺酸基因标签(6his-tag)的自杀基因NTR,用合成的HRE寡核苷酸单链退火,多次重组克隆构建5HRE。将NTR基因、5HRE和AFPp与酶切去除了巨细胞病毒即刻早期启动子(Pcmvie)的pIRES2-EGFP载体重组,构建携带5HRE、AFPp和NTR基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-5HRE-AFPp-NTR。结果成功克隆了融合6his-tag的NTR基因,NTR基因与Genbank公布的序列一致。成功合成了5HRE,测序与预期相符。将上述片段和AFPp重组到去除了Pcmvie的pIRES2-EGFP载体上,酶切鉴定和DNA序列分析无误。结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-5HRE-AFPp-NTR,为下一步的体外实验奠定了基础。
- 周培华孙学军王燕禄韶英
- 关键词：缺氧反应元件肝癌自杀基因
- 缺氧诱导的肝癌靶向性基因治疗载体的构建和检测被引量：3
- 2006年
- 目的:构建缺氧诱导的AFP基因启动子(HRE-AFPp)调控的基因表达载体,并检测该调控元件的特异性和对缺氧诱导的反应性。方法:用PCR方法从人类基因组中扩增VEGF基因缺氧反应元件(HRE)和AFP基因启动子(AFPp),将上述片段与含有报告基因(强化绿色荧光蛋白基因)载体pEGFP-1的多克隆位点连接,构建成为缺氧诱导的AFP基因启动子调控的基因表达载体(pEGFP-[HRE]AFPp)。用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的细胞系,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观测重组AFPp的活性,并用流式细胞术检测缺氧诱导是否对其有调控作用。结果:成功地将HRE、AFPp克隆到报告基因载体pWGFP-1的多克隆位点,酶切鉴定和DNA序列分析无误,荧光显微镜观测证实EGFP能在AFP阳性肝癌细胞特异性表达,流式细胞术检测证实,16 h缺氧诱导能增强EGFP的表达(P<0．01)。结论:缺氧诱导的AFP顺式作用元件修饰的基因治疗载体,在基因转录水平特异性调控目的基因的表达,为下一步将其作为肝癌基因治疗载体奠定了基础。
- 禄韶英王燕孙学军白纪刚张伟
- 关键词：缺氧反应元件肝细胞癌
