国家自然科学基金(30400453)
- 作品数：6 被引量：27H指数：3
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- 相关机构：解放军第309医院第二军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人退变椎间盘组织细胞凋亡相关基因表达的初步研究被引量：11
- 2006年
- 目的探讨细胞凋亡与腰椎间盘退变的发生机制。方法一步法抽提6例退变及6例正常椎间盘组织的总RNA,分别用cy3,cy5荧光标记,获得两组椎间盘cDNA的探针,与cDNA表达谱芯片杂交,扫描芯片荧光信号图像,对所获得的凋亡相关基因进行生物信息学分析。采用原位末端标记法(TUNEL)和免疫组化方法,检测12例人退变椎间盘及10例正常椎间盘组织的细胞凋亡状态及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果在4096条基因中,与细胞凋亡相关类蛋白为10条,其中Bax蛋白相关基因表达增高,Bcl-2蛋白相关基因表达降低。正常组TUNEL检测凋亡指数(AI)为(24.897±3.620),Bcl-2阳性细胞百分率为(31.440±4.150)%,Bax阳性细胞百分率为(29.372±2.588)%,阳性颗粒平均光密度值分别为(0.183±0.010)、(0.203±0.012)和(0.169±0.005);退变组AI为(49.232±3.440),Bcl-2阳性细胞百分率为(18.239±2.470)%,Bax阳性细胞百分率为(52.349±3.764)%,阳性颗粒平均光密度值分别为(0.152±0.003)、(0.310±0.008)和(0.262±0.014),两组间的AI均值、Bcl-2、Bax蛋白表达均有显著性差异(P<0.05)。结论细胞凋亡在椎间盘退变的进程中发挥重要作用,凋亡相关基因Bcl-2和Bax参与了髓核细胞凋亡的发生和发展过程。
- 胡明马远征张传森陈道运陈兴才晓军白一冰
- 关键词：基因表达谱椎间盘退变细胞凋亡BAX
- 上皮膜蛋白-1在人椎间盘髓核细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的观察上皮膜蛋白-1(epithelia membrane protein-1,EMP-1)在人椎间盘髓核细胞中存在的表达。方法利用我们已建成的人胚椎间盘髓核细胞和退变椎间盘细胞培养体系,采用半定量反转录PCR和免疫组化方法检测EMP-1在这两种细胞中的表达情况。结果人胚及退变椎间盘髓核细胞中EMP-1均有表达,分布在不同部位,且具有一定的丰度。结论 EMP-1在正常和退变椎间盘细胞中的存在和生物学特性改变,提示EMP-1可能在椎间盘退变中担当重要角色。
- 胡明马远征李大伟黄凤山杨达宇杨同磊刘玉川
- 关键词：髓核细胞椎间盘退变基因表达
- 成人退变性椎间盘髓核细胞体外培养及形态学观察被引量：3
- 2011年
- 目的通过对成人退变椎间盘髓核细胞的体外培养和形态学观察,进一步研究细胞因素在椎间盘退变中的作用机制。方法取5例患椎间盘突出症并行椎间盘摘除手术的成人髓核,分离后在培养基中进行髓核细胞培养,细胞染色、逆转录聚合酶链式反应、免疫荧光检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达。结果椎间盘髓核细胞可在体外培养,30d后方可进行传代,最佳的培养条件为胎牛血清/培养基体积分数为10%～20%,pH值7.0。髓核细胞中出现Ⅰ型胶原,并具有较高的表达,Ⅱ型胶原表达微弱。结论成人退变髓核细胞体外培养时间较长,细胞增殖能力低下,特定培养条件的摸索是成功与否的关键。
- 胡明马远征黄凤山李大伟冯孟明罗晓波顾苏熙
- 关键词：椎间盘退变髓核细胞细胞培养
- 慢病毒介导的RNA干扰技术构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型被引量：6
- 2012年
- 目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台。方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h后收集病毒上清并感染人胚椎间盘髓核细胞,Western blot、RT-PCR鉴定基因干扰效果,凝胶成像分析软件对条带显色程度进行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值。结果:重组慢病毒滴度测定约为1×107U/ml,感染靶细胞后得到EMP-1基因低表达细胞模型,EMP-1mRNA表达水平比正常细胞下降了50%。半定量RT-PCR结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Westernblot结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01。结论:通过慢病毒包装技术,成功构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型。
- 胡明马远征李大伟黄凤山杨达宇杨同磊刘玉川
- 关键词：椎间盘慢病毒属膜蛋白质类RNA干扰
- 线粒体凋亡途径参与表皮膜蛋白1诱导的细胞调亡被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨人表皮膜蛋白1(hEMP1)诱导细胞凋亡的信号途径。方法:构建包含hEMP1基因编码框的真核表达载体pcDNA3.1(+)EMP1,瞬转HEK293细胞后荧光倒置相差显微镜、流式细胞术检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活力以及线粒体膜电位的变化。结果:荧光倒置相差显微镜、流式细胞术结果显示,过表达EMP1后细胞Caspase-3、Caspase-9活力显著增强,线粒体膜电位改变增多,而Caspase-8的活力变化不明显。结论:线粒体凋亡途径参与hEMP1诱导的细胞凋亡。
- 李志勇熊绍虎胡明张传森
- 关键词：凋亡线粒体膜电位
- 人胚椎间盘细胞体外培养模型的建立和鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的通过建立人胚椎间盘细胞体外培养模型,进一步研究细胞因素在椎间盘退变中的作用机制。方法取4例人体胚胎腰椎间盘,在改良Eagle培养基中建立椎间盘细胞模型,细胞染色、逆转录聚合酶链式反应、免疫荧光检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达进行鉴定。结果椎间盘细胞可在体外培养并进行传代,细胞中Ⅰ、Ⅱ型胶原具有较高的表达,细胞具有较高的分化状态。结论源自胚胎的髓核细胞于体外环境中可以较长时间维持其表型不变,且表型与正常髓核细胞很接近。
- 胡明马远征黄凤山李大伟冯孟明罗晓波顾苏熙
- 关键词：椎间盘髓核细胞细胞培养
