国家自然科学基金(81041118)
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- 嵌合与移植免疫耐受研究进展
- 2013年
- 特异性移植免疫耐受是指在不使用免疫抑制剂的情况下，受者对供者抗原产生特异性免疫无反应，而同时又保持对除移植物以外的非己抗原的正常免疫应答能力。毫无疑问，诱导受者产生针对移植物的免疫耐受是彻底解决器官移植排斥反应问题的理想措施。在诸多耐受诱导研究中，诱导受者建立嵌合体似乎是最接近临床可能的方法。嵌合体是指来源于供者的异基因背景的细胞在受者体内长期存在的状态。尽管在天然嵌合体是移植耐受的“因”还是“果”的问题上还存在争议，但已有越来越多的动物实验和临床研究证实诱导受者建立嵌合体可以明显延长移植器官的存活时问。因此，人们试图从嵌合体的研究中获得免疫耐受诱导的突破，本文就这方面的有关进展综述如下。
- 付蔚华李卫东
- 关键词：嵌合体免疫抑制剂
- 分子嵌合细胞降低小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠T细胞刺激反应的研究
- 2012年
- 本文通过构建分子嵌合骨髓造血干细胞（bone marrow hematopoietic stem cells，BHSCs）及前体T（pre-T）细胞，探讨输注分子嵌合细胞后，受体对异基因供体来源T细胞刺激的反应能力的影响。依据GenBank中C57BL／6小鼠MHCI等位基因H-2D“和H-2K“序列，构建重组质粒pIRES-H-2D“和pIRES-H-2Kb。BALB／c小鼠BHSCs和pre-T细胞培养，无菌条件取股骨、胫骨，收集骨髓细胞。加入红细胞裂解液，在完全RPMI1640培养液中加入细胞因子rmIL-3（20ng／m1）、rmlL-6（20ng/ml）和rmGM—CSF（20ng／m1），7～10d后收获BHSCs，流式细胞仪检测CD34＋细胞表达比例为（34．64±2．76）％。
- 付蔚华阎永嘉易小龙宋东旭王振李卫东
- 关键词：异基因小鼠嵌合分子C57BLC小鼠
- 输注分子嵌合小鼠前体T细胞抑制异源小鼠T细胞增殖反应的研究
- 2014年
- 目的 研究分子嵌合前体T细胞（pre-T细胞）对异基因T淋巴细胞增殖能力的影响,旨在为研究同种异体器官移植诱导免疫耐受提供新策略.方法 RT-PCR获取C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ等位基因H-2Kb和H-2Db基因,并与pIRES质粒连接,构建重组质粒并转染体外培养BALB/c小鼠pre-T细胞构建分子嵌合细胞,并设立未转染及转染空质粒对照组.各组细胞回输BALB/c小鼠,7d后提取各组小鼠脾脏T细胞,将其与C57BL/6小鼠T淋巴细胞混合培养,观察刺激指数（SI）.结果 构建质粒测序表明,插入序列的结果包含GenBank检索的C57BL/6小鼠H-2Kb和H-2Db序列,流式细胞仪检测质粒pIRES-H-2Kb和pIRES-H-2Db转染后,pre-T细胞表面H-2Kb及H-2Db蛋白的表达增高,与未转染组及转染空质粒组相比,其差异均具有统计学意义（P＜0.05）.单向混合淋巴细胞培养结果显示：2质粒共注射pre-T细胞组的SI值（0.764±0.074）较空质粒组（0.983±0.081）和未转染组（0.994±0.142）明显下降,其差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 分子嵌合细胞可降低受体T细胞对异基因T淋巴细胞刺激的增殖反应,有望应用于体内诱导免疫耐受.
- 陆礼宋东旭李卫东付蔚华
- 输注分子嵌合前体T细胞减低小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠T细胞的刺激反应
- 2013年
- 目的构建分子嵌合主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ基因小鼠前体T细胞,并探讨其诱导脾脏T细胞减低对异基因小鼠T细胞反应的可行性。方法体外分离培养BALB/c小鼠前体T细胞,构建携带C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因(H-2Db和H-2Kb)真核表达载体pIRES-H-2Db和pIRES-H-2Kb,分别转染BALB/c小鼠前体T细胞,构建分子嵌合前体T细胞。将分子嵌合前体T细胞回输BALB/c小鼠后7天,获取脾脏T淋巴细胞,与C57BL/6小鼠T细胞进行混合淋巴细胞培养,观测刺激指数(SI)。结果成功体外培养BALB/c小鼠前体T细胞,体外转染C57BL/6小鼠H-2Db和H-2Kb基因至BALB/c小鼠前体T细胞,H-2Db和H-2Kb蛋白表达率分别可达(14.90±0.56)%和(14.20±0.63)%。单向混合淋巴细胞培养显示,输注分子嵌合前体T细胞的BALB/c小鼠脾脏T细胞对C57BL/6小鼠T细胞SI,在pIRES-H-2Db和pIRES-H-2Kb转染的小鼠前体T细胞共注射组为(0.764±0.074),比空质粒组(0.983±0.081)和未转染组(0.994±0.142)明显下降(均P<0.05)。共注射组SI值分别与转染质粒pIRES-H-2Db组SI值(0.859±0.085)和转染质粒pIRES-H-2Kb组SI值(0.860±0.097)相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论输注分子嵌合MHC-Ⅰ基因前体T细胞的小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠T细胞刺激反应明显减低。
- 付蔚华宋东旭王振何向辉李卫东
