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结缔组织生长因子对Kupffer细胞诱导的肝星状细胞激活的影响: 2009年; 目的探讨肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）表达对Kupffer细胞（KC）诱导的HSC激活的影响。方法构建含CTGF的RNA干扰载体。将肝星状细胞系rHSC-99分为3组：对照组、空载体组和RNA干扰组。采用RT—PCR方法检测HSC的CTGF表达。分离培养KC，建立各组HSC与KC的共培养体系，MTF检测HSC的增殖情况；RT—PCR检测HSC的TGF—β1、Ⅰ型前胶原的表达；Western Blot检测HSC的TGF—β1表达，ELISA检测共培养上清中Ⅰ型胶原的表达；免疫荧光化学检测HSC的α—SMA的表达。结果构建CTGF的RNA干扰载体Psilencer 3．1 H1-Neo—CTGF。RNA干扰后CTGF表达降低22％。KC得率为5×10^7，活率〉98％。在HSC和KC共培养体系中，RNA干扰HSC的CTGF表达后，与KC共培养的HSC活化和增殖明显被抑制，与对照组相比，HSC的增殖降低29％（t=20．17，P〈0．01）。Ⅰ型前胶原和α-SMA的表达下降38％，细胞培养上清中Ⅰ型胶原的分泌量下降48％（t=12．18，t=7．81，t=15．96，均P〈0．05）。TGF—β表达则没有明显的变化。结论阻断HSC的CTGF表达能抑制由KC诱导的HSC激活。; 李涛宋盛晗冷希圣朱继业彭吉润魏玉华; 关键词：肝星状细胞结缔组织生长因子库普弗细胞

肝星状细胞中蛋白激酶C活性改变对其表达血小板源生长因子及增殖的影响被引量：4: 2007年; 目的观察蛋白激酶C(PKC)活性改变对肝星状细胞(HSC)表达血小板源生长因子(PDGF)的影响及对HSC增殖和激活的作用。方法将肝星状细胞系rHSC-99随机分为3组:对照组(A组);PKC激动剂PMA 0.5μmol/L组(B组);PKC抑制剂Calphostin C 100 nmol/L组(C组)。加药后0、3、6、12、24 h分别检测各组细胞PKC活性的变化;作用24 h后,采用Western blot方法检测各组细胞PDGF和胞外信号调节激酶(ERK)的表达;采用免疫荧光化学方法检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;采用MTT法检测细胞的增殖情况。结果PMA作用后PKC的活性显著增强,而Calphostin C则抑制PKC的活性。PKC活性增强后,与对照组比较HSC的PDGF表达升高了1.4倍(P<0.01),ERK表达升高了1.2倍(P<0.05);α-SMA的表达升高了1.3倍(P<0.01),并促进HSC的增殖;PKC活性抑制后则能抑制以上的作用。结论PKC活性的改变能调控HSC中PDGF的表达,在HSC的增殖和激活中发挥调节作用。; 李涛冷希圣朱继业郭宴同魏玉华; 关键词：肝星状细胞蛋白激酶C 血小板源生长因子增殖

蛋白激酶C及转化生长因子β1信号通路对肝星状细胞激活的影响被引量：3: 2007年; 目的探讨蛋白激酶C（PKC）活性改变对HSC表达TGF β1的影响及在HSC激活中的作用。方法将肝星状细胞系rHSC-99分为3组：对照组（A组），PKC激动剂佛波酯0．5μmol／L组（B组），PKC抑制剂Calphostin C 100nmol／L组（C组）。加药后0、3、6、12h和24h分别检测各组细胞PKC活性的变化；作用24h后，采用Western blot和RT—PCR方法检测各组细胞TGF β1，Smad 4，Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达；采用MTT法检测细胞的增殖情况。结果佛波酯作用后PKC的活性显著增强，而Calphostin C则抑制PKC的活性。PKC活性增强后，与对照组相比TGF β1及其下游信号分子Smad 4的表达分别升高了4．8倍和13．1倍（P〈0．01）；HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达分别升高了2．4倍、1．8倍和1．3倍（P〈0．01），并促进HSC的增殖；PKC活性被抑制后则能抑制以上作用。结论PKC活性的改变能调控HSC中TGF β1的表达，在HSC的激活中发挥调节作用。; 李涛冷希圣朱继业郭宴同魏玉华; 关键词：转化生长因子Β 蛋白激酶C 肝星状细胞

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国家自然科学基金(30400427)