国家自然科学基金(30400468)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
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- c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞增殖的调节作用及机制被引量：8
- 2005年
- c-ski是成纤维细胞增殖的复杂调节子,它对中胚层来源的皮肤成纤维细胞增殖的作用还不清楚。在观察正常成纤维细胞周期c-ski表达的时相特点的基础上,通过体外转染c-ski,观察它对细胞增殖活性、细胞周期进展以及周期蛋白表达的影响。结果显示:c-skimRNA表达在加入血清后开始升高,在细胞周期G1期的高峰期达到峰值,S期显著下降,在G2/M期维持在较低的水平;转染的c-ski可以以剂量依赖的方式增加细胞的增殖活性,并且可以逆转Smad3对细胞增殖活性的抑制作用;C-ski使成纤维细胞提前达到G0/G1期的最低点,进入S期;同时细胞G1期周期蛋白cyclinD的表达增加。这些结果表明:c-ski是皮肤成纤维细胞G1期的调节子,通过加快G1期进展促进增殖,抑制Smad3活性,促进cyclinD的表达可能与这一作用的分子机制有关。
- 刘霞李平张恩刘萍周萍周元国
- 关键词：皮肤成纤维细胞细胞增殖细胞周期
- LPA、LPS对P815细胞和大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响
- 目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)、内毒素(LPS)刺激 P815细胞和大鼠腹腔肥大细胞后对 P815 细胞和大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响。
- 陈星云赵艳熊仁平刘苹李平周元国
- 关键词：肥大细胞脱颗粒LPS
- 血清浓度对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 目的比较低血清浓度(0.4%)和正常血清浓度(10%)培养条件对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响。方法原代大鼠皮肤成纤维细胞分别采用0.4%和10%血清浓度培养,加TGF-β1刺激细胞后,分别用BrdU ELISA法检测细胞增殖情况,噻唑蓝(MTT)比色法制作细胞生长曲线。结果0.4%和10%血清浓度下,250pg/ml TGF-β1均促进成纤维细胞增殖(P<0.01),并促使生长曲线的峰值提前和增加。而25ng/ml TGF-β1均抑制成纤维细胞增殖(P<0.05),并导致生长曲线峰值的滞后和降低。结论血清浓度对大小剂量TGF-β1刺激成纤维细胞增殖变化无明显影响。
- 刘苹李平周元国雷英
- 关键词：血清TGF-Β1细胞增殖MTT法BRDUELISA法
- 利用pcDNA 3.0裸质粒探讨创伤愈合动物模型中转入基因的分布规律
- 2006年
- 目的 通过在Wistar大鼠皮肤伤口局部应用含半乳糖苷酶（LacZ）报告基因的裸peDNA3．0重组质粒，建立创伤愈合转基因治疗动物模型并评价其应用价值。方法 通过建立大鼠全层皮肤切割伤模型，采用自身对照，在治疗侧伤口周围局部注射重组转染裸pcDNA3．0-LacZ质粒，通过B-gal原位染色检测注射3、30、100μg剂量后1、3、6、15天及愈合时的伤口组织标本中报告基因LacZ的表达，确定目标基因表达效率。结果 报告基因LacZ主要表达于皮下成纤维细胞中，100μg剂量有较高表达，表达效率为10．3％，表达时间主要在注射后3-6天，15天时仍可检测到少量表达细胞，愈合时及对照侧各个时相点均未检测到表达。结论 重组的裸pcDNA3．0-LacZ质粒能成功转染伤口的成纤维细胞等修复细胞，表达效率及时间适用于动物创伤愈合的转基因治疗。
- 李平熊仁平刘苹刘霞张恩周元国
- 关键词：创伤愈合基因治疗裸质粒半乳糖苷酶
- Wistar大鼠smad3 cDNA序列测定及其mRNA水平实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的：克隆和测定Wistar大鼠smad3基因部分序列，构建检测Wistar大鼠smad3基因表达的重组质粒标准品并建立实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）方法。方法：提取并培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞的总RNA，逆转录（RT）-PCR扩增，将扩增产物克隆到PMD-18T载体上，测序分析。用已测定序列的T载体作为标准品建立实时荧光定量PCR方法，并检测转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激对培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3 mRNA表达的影响。结果：测定Wistar大鼠smad3基因cDNA序列长415bp，其与人、家鼠、小鼠具有较高的同源性，已被GenBank收录（DQ409172）。建立的实时荧光定量PCR方法在10^3-10^7拷贝数/μl的标准品梯度稀释范围内相关系数为0.98946。25ng/ml TGF-β1刺激后Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3基因表达升高为PBS刺激对照组的1.5倍。结论：获得Wistar大鼠smad3基因序列并成功建立了smad3实时荧光定量PCR的方法，为Smad3作用的分子机制研究提供了实验基础。
- 李平熊仁平刘苹赵艳朱敏周元国
- 关键词：SMAD3基因克隆
- 血清浓度对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响
- 目的:比较低血清浓度(0.4%)和正常血清浓度(10%)培养条件对 TGF-β1刺激成纤维细胞增殖影响。方法:原代培养的大鼠皮肤成纤维细胞,分别采用低血清浓度(0.4%)和正常血清浓度(10%)
- 刘苹李平周元国
- 关键词：血清TGF-Β1细胞增殖
- 文献传递
- c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞抗辐射作用的影响被引量：3
- 2006年
- 目的研究原癌基因c ski对大鼠皮肤成纤维细胞抗辐射作用的影响,并探讨其可能的机理。方法采用Annexin V FITC PI标记的方法,通过流式细胞仪检测2～8Gy的软X线照射对培养的大鼠皮肤成纤维细胞凋亡的影响;观察转染c ski基因后细胞凋亡的变化;并采用Westernblot检测c ski对凋亡蛋白Bax、Bcl2表达的影响。结果软X线照射以剂量依赖的方式增加细胞凋亡,并且随着时间的延长进一步增加,大约在36h时达到峰值。转染c ski基因使4Gy照射24h后的成纤维细胞凋亡率显著下降。转染c ski基因48h后,Bax的表达和对照组差异无统计学意义,而Bcl2的表达显著增加。结论c ski可降低成纤维细胞的辐射敏感性,促进Bcl-2的表达可能是其机理之一。
- 刘霞李平张恩刘苹周萍周元国
- 关键词：成纤维细胞凋亡抗辐射作用
- Wistar大鼠c-Ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PCR的建立
- 目的:测定 Wistar 大鼠 c-Ski 基因部分序列,并应用于建立检测大鼠 c-Ski 基因表达的实时荧光定量 PCR 的方法。方法:提取培养的 Wistar 大鼠皮肤成纤维细胞总 RNA,通过 RT-PCR 扩增,...
- 李平刘苹熊仁平赵艳朱敏周元国
- c-Ski和Smad3在大小剂量TGF-β1刺激24小时后大鼠皮肤成纤维细胞中的表达及意义
- 目的:通过观察大小剂量 TGF-β1刺激24小时后 c-Ski 和 Smad3的表达变化和细胞转染 c-Ski 或 Smad3同时加 TGF-β1刺激后细胞增殖的变化,来探讨 c-Ski、Smad3在 TGF-β1对成纤...
- 李平赵艳熊仁平刘苹陈星云周元国
- 关键词：SMAD3成纤维细胞
- C-ski和Smad3在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化及意义被引量：3
- 2007年
- 目的研究C-ski和Smad3在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化和意义。方法软X线照射诱导大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤,Western blot和RT-PCR观察C-ski、Smad3蛋白和mRNA水平的变化,EMSA检测Smad3转录活性的变化。结果辐射后2h,C-ski、Smad3蛋白和mRNA水平、Smad3转录活性无显著变化,4h开始,C-ski表达逐渐下降,Smad3表达和转录活性逐渐升高,在8h分别达到峰谷和峰顶。结论C-ski和Smad3参与大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤的病理过程,辐射后C-ski下降,Smad3升高,并导致Smad3转录活性增强,细胞增殖受抑,凋亡增加。
- 刘霞李平张恩刘苹周元国
- 关键词：SMAD3成纤维细胞
