江苏省自然科学基金(BK2009363)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：汪晨蔡恒张凯乔广军冯小海更多>>
- 相关机构：南京工业大学南京绿叶思科药业有限公司更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 适用于野生型枯草芽孢杆菌转化有机溶剂方法的建立和优化被引量：4
- 2011年
- 用经典的spizizen方法将穿梭质粒pLJ导入Bacillus subtilis 168、Bacillus subtilisWB600、Bacillus subtilis WB800中,均能达到70多个转化子/μg DNA的较高转化效率,但用此方法将该质粒导入由本实验室筛选并保存的野生型Bacillus subtilis NX-2中,不能获得转化子。本研究对spizizen转化方法进行了改进,通过添加不同浓度的吐温-80,DMSO、丙酮、甲苯、乙醇等有机溶剂,均能获得转化子。同时,本研究对转化条件进行了优化,分别选取吐温-80、DMSO、甲苯等3种效果较好的添加剂设计正交实验。试验结果表明,在添加4%吐温-80、3%DMSO、1%甲苯的条件下得到了34个转化子/μg DNA的较高转化效率。还研究了质粒与感受态共培养时间和感受态稀释倍数对转化的影响,当质粒与感受态共培养时间为3 h,感受态稀释5倍时,转化效率较高。
- 魏艳张丹蔡恒徐虹李莎冯小海许宗奇汪晨
- 关键词：枯草芽孢杆菌有机溶剂
- 多杀菌素高产菌株的诱变选育被引量：4
- 2012年
- 新型微生物杀虫剂多杀菌素具有生物农药安全性和化学合成农药速效性,对影响经济的重要害虫有极高的活性,本文以刺糖多胞菌为出发菌株,通过自然选育得到出发菌株A6,在能量10keV、剂量1.4×1016ions/cm2的条件下进行氮离子束诱变,获得突变株AN-099;再通过照射距离为30cm的15W紫外灯照射30s进行紫外线复合诱变,获得突变菌株ANU-069,多杀菌素产量达到175.62μg/mL,比出发菌株A6提高了71.42%,比离子束诱变菌株AN-099提高了30.22%,并且此菌株具有良好的遗传稳定性,用于以后的发酵研究。
- 乔广军汪晨张凯张恒丽蔡恒
- 关键词：多杀菌素诱变菌株选育
- γ-PGA合成酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达
- 2013年
- 研究了γ-PGA合成酶基因pgsBCA在大肠杆菌中的克隆和表达,以pET28a(+)为载体,构建表达载体pET28a(+)-pgsBCA,导入宿主Escherichia coli Rosetta中,诱导使之表达。将发酵液离心去除菌体,得到上清液用旋转蒸发仪浓缩后,采用SDS-PAGE电泳检测重组菌E.coli Rosetta/pET28a-pgsBCA产生的γ-PGA分子量在200-300kDa之间,将产物水解,采用薄层层析法鉴定产物由单一的谷氨酸组成,表明γ-PGA合成酶基因pgsBCA在大肠杆菌中成功表达。
- 乔广军汪晨周志蕙张凯蔡恒
- 关键词：大肠杆菌克隆
