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人乳头瘤病毒感染与宫颈上皮内瘤变疾病进展的相关性研究被引量：7: 2014年; 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染对宫颈上皮内瘤变(CIN)疾病演变的影响。方法选取2010年1～12月在中国人民解放军第324医院妇产科门诊经阴道镜下活检并病理诊断为CINⅠ级的120例患者为研究对象,采用杂交捕获2代(HC-Ⅱ)方法定量检测宫颈分泌物HPV DNA的含量,并根据有无感染HPV将患者分为CINⅠ+HPV(-)组及CINⅠ+HPV(+)组,随访3年对患者进行宫颈脱落细胞学检查(TCT)及HR-HPV检测,观察患者CIN疾病演变情况。结果 CINⅠ+HPV(-)组有13.33%患者疾病进展,而CINⅠ+HPV(+)组有21.67%患者疾病进展,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV感染在CIN的疾病进展中具有重要作用,防治HPV的感染有利于减缓CIN的进展。; 牟玲胡娅兰英吕凤林; 关键词：乳头状瘤病毒宫颈上皮内瘤样变疾病演变

乳头瘤病毒11型完整基因组成功转染角质形成细胞并促其增殖: 2008年; 构建含人乳头瘤病毒11型(Human papillomavirus type11,HPV11)完整开放读码框(Open reading frame,ORF)基因组的质粒并对其功能进行初步验证,为构建HPV11转基因动物模型奠定基础。分别构建重组质粒pQE-Trisystem-EGFP/HPV11(pE/H)、pQE-Trisystem-EGFP/1.1copyHPV11(pE/1.1H),将pE/1.1H、pE/H、闭环状HPV11基因组分别转染原代人角质形成细胞(Keratinocyte,KC)并进行检测。在质粒上成功构建了目的序列,转染后在pE/1.1H组、pE/H组、HPV11组中检测到HPV11E6基因的表达;在pE/1.1H组、pE/H组中检测到荧光;HPV11组、pE/H组、pE/1.1H组具备促细胞增殖功能,实验组间比较pE/1.1H组稍弱(P<0.01),但与对照组相比均差异极显著(P<0.01)。将具有完整ORF的HPV11基因组(1.1copyHPV11)成功构建于质粒上,其具备野生型HPV11病理表型;为研究低危型HPV致病机理提供了实验材料和方法学指导;为进一步构建HPV11转基因小鼠奠定了基础。; 张一吕凤林陈彩宇; 关键词：人乳头瘤病毒11型角质形成细胞细胞增殖

人乳头瘤病毒11型DNA中CpG基序甲基化状态分析及生物活性的研究被引量：5: 2005年; 目的　对人乳头瘤病毒 11型全核苷酸序列的CpG基序 (CpGmotifs)进行分析 ,为阐明尖锐湿疣的发病机制和提高DNA疫苗的效能奠定理论基础。方法　对从pBR32 2 HPV11重组质粒上酶切下来的HPV11全长DNA进行计算机分析 ,包括分类、计数和定位 ;并用限制性内切酶PCR法分析HPV11DNA中CpG基序的甲基化状态 ,即分别用甲基化敏感的限制性内切酶AccⅡ、HaeⅡ和HpaⅡ对HPV11DNA进行酶切消化 ,再以HpaⅡ切割位点侧翼序列为引物 ,以HpaⅡ酶切产物为模板 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增HPV11DNA片断 ,并用HPV11DNA刺激表达有pCIneo TLR9的HEK2 93细胞 ,ELISA法检测TNF al pha、IFN alpha和IL 12的分泌。结果　CpG的“C”的侧翼为两个嘌呤 ,“G”的侧翼为两个嘧啶 ,在HPV11中共 14个。HPV11全基因组被AccⅡ切成 2个片断、被HaeⅡ切成 3个片断、被HpaⅡ切成 5个片断 ,而且以HpaⅡ酶切产物为模板进行PCR扩增 ,未能得到相应的片断。HPV 11DNA刺激有人TLR9表达的HEK2 93细胞后能检测到TNF alpha、IFN alpha和IL 12的分泌。结论　乳头瘤病毒 11型DNA中含有GACGTT等非甲基化的CpG基序。; 艾军华吕凤林左国伟金丹李元朝胡承香; 关键词：人乳头瘤病毒11型 CPG基序核苷酸序列分析

Cre/Loxp和四环素系统在基因可控表达中的应用被引量：3: 2007年; 本文介绍了目前最常见的四环素调控系统和Cre/LoxP系统的基本原理、应用情况、近年来的研究进展总结,比较了两种系统的优缺点,介绍了两种系统联合应用的成果,并且提出了Cre/Loxp系统在HPV11全基因组定向表达中的应用,并由此提出利用Cre/Loxp系统解决多个基因定向表达问题的设想。; 张一黎晓敏吕凤林梁存军宋容; 关键词：基因表达调控 CRE/LOXP系统

人类人工染色体作为转基因载体的应用前景被引量：2: 2005年; 自1997年首次成功构建人类人工染色体(human artificial chromosome,HAC)以来,对其理论、方法学问题的研究一直就是人们关注的焦点,并引起了科学家们的极大兴趣,目前已能采用不同的方法获得多种类型的HAC。与酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)等相比,HAC不整合到细胞的基因组中,以一个独立的功能性染色体单位而存在,并在细胞中进行正常的有丝分裂和减数分裂。迄今的研究表明:HAC可以携带大片段基因组DNA,是研究人类基因表达和调控、染色体功能基本单元的重要工具,也是建立HAC动物模型的重要手段。在未来的基因治疗方面有着广阔的应用前景。; 左国伟吕凤林; 关键词：基因载体基因表达基因治疗

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