江苏省自然科学基金(BK2009357)
- 作品数：7 被引量：24H指数：4
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- 相关领域：生物学理学更多>>
- Bacillus subtilis NX-2聚谷氨酸合成酶基因pgsBCA的克隆及生物信息学分析
- 2011年
- 克隆Bacillus subtilis NX-2中的聚谷氨酸合成酶基因pgsBCA并进行测序。应用生物信息学分析方法和工具对PgsB、PgsC、PgsA蛋白质的理化性质、跨膜区域、信号肽、细胞定位等进行分析和预测,并探讨它们的作用方式。结果表明:PgsB蛋白不含有跨膜区,它与ATP结合并催化ATP的水解,为PGA合成提供能量;PgsC蛋白保守性最高,其含有4个跨膜区域,是疏水性膜结合蛋白;PgsA为亲水性稳定蛋白,在N端存在1个跨膜区域。
- 张丹徐虹李莎许宗奇魏艳
- 关键词：BACILLUSSUBTILIS生物信息学
- 微生物来源蔗糖异构酶的研究进展及应用被引量：7
- 2011年
- 异麦芽酮糖是近年来新兴的一种功能性甜味剂,在食品、医药等工业中具有广阔的应用前景。蔗糖异构酶是生物法工业化生产异麦芽酮糖最有效的酶。本文介绍了近年来国内外蔗糖异构酶的生产菌株、酶学性质、结构与功能,阐述了蔗糖异构酶催化生产异麦芽酮糖和海藻酮糖的机制及其在异麦芽酮糖生产中的应用。并展望了其今后的研究方向:应从SIase高产菌株的选育、发酵产酶工艺优化方面开展工作,大幅度提高产酶水平。
- 李莎徐虹
- 关键词：异麦芽酮糖酶学性质
- 大黄欧文菌中蔗糖异构酶基因的克隆表达及应用被引量：1
- 2011年
- 以大黄欧文菌(Erwinia rhapontici)NX-5基因组DNA为模板,PCR扩增得到编码蔗糖异构酶(SIase)的基因palⅠ,构建克隆载体pUC18-palⅠ。经测序正确后,将palⅠ亚克隆至表达载体pET-22b(+)上,并在E.coliBL21(DE3)中成功表达相对分子质量约为66 000的可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱对表达产物进行纯化,纯酶的比活为40 U/mg。转化条件研究表明:重组菌能够高效转化质量分数为50%的蔗糖溶液,转化液中异麦芽酮糖得率为85%。
- 李莎任贲林璐徐虹蔡恒
- 关键词：克隆表达
- 蔗糖异构酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达及重组菌的细胞固定化被引量：3
- 2010年
- 分别利用IPTG和乳糖两种诱导物诱导蔗糖异构酶(SIase)基因在E.coliBL21(DE3)中实现表达,对诱导温度、诱导时机、诱导物浓度、诱导持续时间进行比较分析并优化,确定了二者的最佳诱导条件,在E.coli培养3h后(OD600约为0.9)添加终浓度为0.8mmol/L的IPTG(0.5mmol/L乳糖)在20℃(24℃)条件下诱导14h(12h)能获得最高的蛋白表达量及SIase酶活。在最优条件下以IPTG为诱导物时目的蛋白占总蛋白的41.6%,单位体积培养液中SIase酶活为12.37U/mL,以乳糖为诱导物时分别为27.2%,14.72U/mL,从收获酶活角度考虑可见乳糖作为诱导物的优势;而后利用海藻酸钠包埋法固定化重组菌,转化初始浓度为500g/L的蔗糖溶液,转化10～11h后异麦芽酮糖平均得率在83%以上,蔗糖平均转化率大于99%,固定化细胞能够连续稳定转化25批次,转化效率相对于原始菌提高了近55%。
- 任贲李莎徐虹蔡恒
- 关键词：乳糖诱导IPTG固定化
- 利用固定化重组大肠杆菌细胞生产D-塔格糖被引量：4
- 2011年
- 利用经海藻酸钙包埋的重组大肠杆菌细胞催化D-半乳糖生产D-塔格糖,考察了细胞包埋量、反应条件对固定化细胞催化效率以及对D-塔格糖生产稳定性的影响。确定的最优转化条件为:温度65℃,pH 6.5,添加终浓度为1 mmol/L Mn2+,底物(D-半乳糖)浓度100 g/L,重组大肠杆菌细胞用量40 g/L。固定化小球在0.3%戊二醛溶液中交联30 min可以显著提高其在高温下的机械强度。考察了异构化反应体系中硼酸与底物间的摩尔比对产率的影响。研究结果表明,添加适量的硼酸可以改变原有的化学反应平衡,实现D-塔格糖的高产。利用D-半乳糖为底物在最优的反应条件下催化24 h,固定化细胞对D-半乳糖的转化率最高,可达65.8%,连续转化8批次的平均转化率为60.6%,为工业化生产D-塔格糖奠定了基础。
- 付凤根徐铮李贵祥李莎冯小海徐虹
- 关键词：D-塔格糖固定化细胞重组大肠杆菌硼酸L-阿拉伯糖异构酶
- 响应面法优化重组大肠杆菌产蔗糖异构酶发酵培养基被引量：4
- 2011年
- 通过碳氮源的不同浓度对重组大肠杆菌E.coil BL21(DE3)发酵产蔗糖异构酶(SIase)的影响,并借助于数学分析软件Design Expert,结合Plackett-Burman试验设计和中心复合试验设计分析法,对蔗糖异构酶的产生菌进行了发酵培养基的优化研究。实验表明,最佳培养基组分为甘蔗糖蜜10.65 g/L,玉米浆22.22 g/L,NaCl7.57 g/L,MgSO4.7H2O0.52 g/L,KH2PO44.46g/L,优化后的蔗糖异构酶活力达到29.1U/ml,比LB培养基培养重组大肠杆菌(15U/ml),蔗糖异构酶活力提高了94%,与原始菌大黄欧文菌NX-5相比提高了21.4倍(1.3U/ml)。
- 汪晨李莎徐虹魏艳蔡恒
- 关键词：响应面甘蔗糖蜜乳糖诱导
- 生物法制备1,5-戊二胺的研究进展被引量：7
- 2012年
- 生物法制备1,5-戊二胺是一种创新且具有潜在竞争力的生产方法,从生物法制备1,5-戊二胺研究现状、赖氨酸脱羧酶性质、1,5-戊二胺的生产菌种及代谢途径分析几方面进行了综述,并对其应用前景进行了展望。
- 张凯蔡恒汪晨张恒丽
- 关键词：谷氨酸棒杆菌大肠杆菌代谢途径
