浙江省农业科技成果转化资金项目(2011E61018)
- 作品数：7 被引量：26H指数：4
- 相关作者：张明洲奚茜龚云飞李沐洁王唯芬更多>>
- 相关机构：中国计量学院杭州迪恩科技有限公司更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程农业科学生物学更多>>
- 赭曲霉毒素A直接竞争ELISA试剂盒的研制被引量：6
- 2012年
- 在多克隆抗体的基础上研制了赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫检测(cd-ELISA)试剂盒。在0～10 ng/mL范围内,该试剂盒50%抑制率(IC50)为1.09 ng/mL,检测灵敏度(IC15)为0.08 ng/mL;与赭曲霉毒素B、C的交叉反应率分别为6.28%和0.16%,而与黄曲霉毒素B1等生物毒素未见有交叉反应;板内与板间平均变异系数分别为2.21%和2.79%;花生、玉米和玉米粉3种样品中OTA的检测低限分别为1.71,1.26和1.85μg/kg,平均添加回收率在83.80%～91.40%;与HPLC检测方法具有较高的相关性,相关系数(R2)分别为0.940、.88和0.90;检测时间只需20 min,可用于花生、玉米及玉米粉中OTA的批量快速筛查。
- 李沐洁奚茜张明洲陈宗伦王唯芬
- 关键词：赭曲霉毒素A多克隆抗体
- 玉米赤霉烯酮单克隆抗体制备及免疫分析被引量：3
- 2013年
- 采用活泼酯法将玉米赤霉烯酮（Zaralenone，ZEN）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成免疫原ZEN—BSA和包被原ZEN—OVA，经紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后免疫BALB/c小鼠；挑选产生高效价和高敏感性抗体的小鼠进行抗原超强免疫．取脾细胞与SP2／0细胞融合获得1株稳定分泌抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞（3D8）。经鉴定，该抗体亚类为IgG1，轻链为k型。经体内诱生腹水并纯化获得效价为l：2．048x106的单克隆抗体。建立了基于单克隆抗体的ZEN间接竞争ELISA法（ic—ELISA），该方法ic50和检出限分别为22．89pg／mL和10．07pg/mL。与a-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇的交叉反应率分别为95％、8％、12％、6％和5％，而与黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、伏马毒素B1和赭曲霉毒素A未见有交叉反应。在玉米、大麦、小麦和燕麦中加标的回收率在86．4％～104．8％之间。该方法灵敏特异。可作为快速检测谷物中玉米赤霉烯酮的初筛方法。
- 李沐洁张明洲奚茜陈宗伦王唯芬龚云飞
- 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体间接竞争ELISA
- 恩诺沙星直接竞争ELISA检测试剂盒的研制被引量：3
- 2013年
- 目的：应用多克隆抗体技术研制一种检测动物食品中恩诺沙星残留直接竞争酶联免疫检测试剂盒。方法：利用直接竞争ELISA法检测人为添加到动物食品中恩诺沙星的含量，与高效液相色谱的检测结果比较，并测定试剂盒的各项指标。结果：恩诺沙星质量浓度0．1～8．1ng／mL，标准曲线的线性回归方程y=-0．3769x＋0．7899（R2=0．9924），方法的检测灵敏度IC50=0．55ng／mL，IC50=0．11ng／mL；板内平均变异系数为3．73％，板间平均变异系数为7．42％；猪肝、猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪血清、牛奶、蜂蜜组织样品中ENR最低检测限分别为3．24．3．33，6．08，0．89，1-34，0．64，0．73，0．58g／kg；添加25．0-200g／kg恩诺沙星时，回收率80．9％～100％。采用ELISA和HPLC两种检测方法的相关性大于95％。结论：本文研制的试剂盒可用于检测动物食品中恩诺沙星的残留。
- 邹晓楠龚云飞奚茜李沐洁张晓峰张明洲
- 关键词：多克隆抗体恩诺沙星动物食品
- 恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- [目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。
- 邹晓楠龚云飞奚茜李沐洁张晓峰方结红陈宗伦王唯芬张明洲
- 关键词：恩诺沙星人工抗原多克隆抗体
- 化学发光免疫法检测食品中恩诺沙星残留的研究被引量：4
- 2014年
- 建立了基于多克隆抗体的化学发光免疫检测技术，用于测定动物源性食品中恩诺沙星残留含量。反应条件优化结果为：抗体包被最佳稀释倍数为64000倍，最佳酶标抗原稀释倍数为256000倍。结果显示：该方法的回归曲线方程为y=-13．898x＋110．38（R。=0．9893），检测线性范围为3-810pg／mL，IC50为69．63pg／mL，ICm为1．41pg／mL；鸡肉、鱼肉、虾肉、蜂蜜、牛奶空白组织样品中恩诺沙星的最低检测限分别为3．76、4．59、2．85、2．65、4．20pg／mL，最低定量限分别为6．13、7.35、3．57、3．73和6．48pg／mL，回收率在88．28％-102．6％，板内和板间的平均变异系数分别为2．61％和4．71％。表明本研究建立的化学发光免疫检测方法满足动物源性食品恩诺沙星残留的检测要求。
- 龚云飞邹晓楠张露露吴莹莹戴明雁陈宗伦张明洲
- 关键词：恩诺沙星食品安全
- 链霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2013年
- 通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE分析偶联情况,计算得链霉素与cBSA、OVA的分子偶联比分别为7.6:1与17.7:1。经动物免疫获得效价为1:40000的链霉素多克隆抗体,采用间接竞争ELISA测定IC50为3.32ng/mL,与双氢链霉素的交叉反应率为105.21%,与同类的其他药物均无交叉反应。
- 奚茜李沐洁龚云飞陈宗伦方结红王唯芬张明洲
- 关键词：链霉素人工抗原多克隆抗体间接ELISA法
- 庆大霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2014年
- 为研究建立庆大霉素的免疫分析技术，合成庆大霉素人工抗原：采用碳二亚胺法将庆大霉素（gentamicin，GM）偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）上，分别合成免疫原GM-BSA和包被原GM-OVA。通过紫外扫描和SDS-PAGE垂直电泳鉴定证明人工抗原偶联成功。以GM．BSA为免疫原，采用新的动物免疫方案免疫新西兰大白兔，获得抗庆大霉素抗血清。在本次免疫新方案中，在动物的生命周期内获得了多于普通免疫的血清量，在多抗血清的制备上是一次抗体工程上的尝试。通过间接酶联免疫对抗血清效价和灵敏度进行跟踪检测，结果表明抗血清效价在九免后稳定在1：20000左右，IC50则稳定在3ng／mL左右。并在八免血清基础上建立了GM间接竞争ELISA法。结果表明，庆大霉素浓度在0．3-243ng／mL，方法的线性回归方程为y=-0．10091nx＋0．6093和R2=0．9845，方法的检测灵敏度IC50=2．954ng／mL，最低检测限IC10=0．056ng／mL。该研究结果为多抗血清制备在量上的突破提供了思路，同时为研制庆大霉素试剂盒提供了良好的基础。
- 许耀心龚云飞陈宗伦奚茜戴明雁吴莹莹刘啊敏张明洲
- 关键词：庆大霉素人工抗原多克隆抗体
