兵团博士基金(05JC08)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 相关作者：郑勇李睿杨小艳褚云香陈卫刚更多>>
- 相关机构：石河子大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：兵团博士基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠Smad7基因真核表达质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:构建并鉴定大鼠Smad7/pcDNA3.1(+)真核表达质粒,为进一步研究Smad7的抗肝纤维化作用提供实验基础。方法:TRIzol法抽提大鼠肝组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,紫外分光核酸蛋白分析仪测定其浓度与纯度,两步法获取大鼠Smad7cDNA片段,CaCl2法制备感受态细胞,应用EcoRI及XhoI在pcDNA3.1(+)多克隆位点处进行双酶切,切胶回收载体及目的片段酶切产物,将回收的线性化pcDNA3.1(+)与Smad7cDNA连接,构建Smad7/pcDNA3.1(+)重组质粒,转化DH5α大肠杆菌,测序鉴定双酶切证实的阳性克隆。结果:电泳检测RNA的完整性良好,28S约为18S的2倍,A260/A280=1.986,纯度较好,阳性克隆酶切后电泳检测在DNAMarker1.3kb处见Smad7目的片段,5.4kb处见线性化pcDNA3.1(+),与预期结果相符,质粒重组成功,并测序证实。结论:大鼠Smad7真核表达质粒构建成功,为进一步单独或联合其他质粒从TGF-β/SMAD信号传导的不同环节干预肝纤维化提供了实验基础。
- 杨小艳郑勇李睿徐丽红周婷杨军
- 关键词：质粒DNA结合蛋白质类肝硬化
- 内皮素、一氧化氮与肝硬化被引量：6
- 2009年
- 肝硬化是各种慢性肝病发展到晚期的一种病理改变,肝功能损害、门静脉高压是其突出的表现。近年来,血管活性物质对肝脏疾病影响的研究已成为一个热点,特别是内皮素(ET)和一氧化氮(NO)。ET和NO是血管内皮细胞产生的生物调节因子,ET是由内皮细胞产生的一种多肽,具有缩血管和扩血管作用,而NO为一种强有力的血管内皮细胞舒张因子,具有强烈扩张血管作用。实验证实ET和NO与肝硬化的发生密切相关。
- 陈卫刚李睿褚云香郑勇
- 关键词：内皮素一氧化氮肝硬化
- 外源Smad7转染肝星状细胞及对转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响被引量：5
- 2009年
- 背景:Smad7是转化生长因子β信号转导途径的主要抑制性蛋白,具有抗纤维化的作用。目的:构建并鉴定大鼠Smad7真核表达质粒,观察外源Smad7可否有效转染肝星状细胞T6,并进一步研究其对转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平的影响。设计、地点:基因重组及细胞观察实验,于新疆石河子大学医学院第一附属医院完成。材料:pcDNA3.1(+)质粒为课题组保留;大肠杆菌DH5α系石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室所赠;肝星状细胞T6细胞由中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所提供品。方法:采用基因重组技术将Smad7cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建大鼠Smad7真核表达质粒。脂质体介导转染肝星状细胞T6细胞,分为正常对照、空质粒及转染组,G418筛选,挑取阳性细胞。主要观察指标:反转录-聚合酶链反应法检测各组中Smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。结果:酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功。Smad7转染组与正常对照组、空质粒组比较:Smad7mRNA表达显著增加(P<0.01);转化生长因子β、Ⅰ型胶原mRNA表达减少(P<0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05)。正常对照组、空质粒组Smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P值均>0.05)。结论:大鼠Smad7真核表达质粒构建成功,外源Smad7转染肝星状细胞T6细胞后可有效表达,并能降低转化生长因子β及Ⅰ型胶原mRNA表达水平。
- 杨小艳杨勇郑勇李睿周婷
- 关键词：SMAD7真核表达质粒转染肝星状细胞
- 外源Smad7基因对肝星状细胞Smad7 mRNA及蛋白表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察外源Smad7基因能否有效转染肝星状细胞及其对Smad7 mRNA和蛋白表达的影响。方法构建鼠Smad7真核表达重组质粒,脂质体介导转染HSC-T6细胞,以RT-PCR和Western blot检测正常对照组、空质粒组及转染组中Smad7表达情况。结果Smad7真核表达质粒构建成功;外源Smad7体外转染肝星状细胞后,Smad7 mRNA和蛋白水平均显著上调,Smad7转染组与正常对照、空质粒组比较:Smad7 mRNA表达显著增加(P=0.009,0.011),蛋白水平显著上调(P=0.020,0.026),正常对照组、空质粒组Smad7 mRNA和蛋白水平表达差异无统计学意义(P=0.944,0.644)。结论Smad7真核表达质粒构建成功,外源Smad7基因可有效转染肝星状细胞,并显著上调Smad7 mRNA和蛋白水平。
- 杨小艳郑勇杨勇李睿孙侃陈卫刚常向云褚云香
- 关键词：SMAD7真核表达质粒抗纤维化
