国家自然科学基金(31000415)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：泸州医学院泸州医学院附属口腔医院更多>>
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- IL-4、IL-13蛋白表达及抗IL-4、IL-13人源单链抗体的筛选被引量：3
- 2013年
- 目的:表达IL-4和IL-13蛋白,从人源单链抗体文库中分别筛选抗IL-4和抗IL-13单链抗体。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-4和IL-13 cDNA;构建硫氧还蛋白融合表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的IL-4和IL-13为抗原从前期构建的人源抗体文库中采用噬菌体展示技术分别筛选抗IL-4和抗IL-13人源单链抗体(scFv)。结果:扩增的IL-4 cDNA大小为280 bp,表达的融合蛋白大小为27 kD左右。扩增的IL-13 cDNA大小为252 bp,表达的融合蛋白大小为25 kD左右。分别以生物素化的IL-4和IL-13蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对人源抗体文库进行3轮富集后,分别有大约37%的scFvs与IL-4有结合特性,有约27%的scFvs与IL-13有结合特性。筛选了4株分别与IL-4和IL-13结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论:成功筛选到抗IL-4和抗IL-13人源性单链抗体。
- 袁青黄黎郭夕源叶迎春年四季
- 关键词：IL-4IL-13人源单链抗体
- 重组人IL-4的克隆、表达和鉴定
- 2014年
- 目的构建人IL-4重组表达载体,表达纯化并鉴定人IL-4重组蛋白。方法采用巢式PCR技术从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)总RNA中扩增人IL-4开放阅读框基因,将扩增的IL-4目的基因与表达质粒pET101/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,进行表达纯化和鉴定。结果采用巢式PCR扩增得到IL-4开放阅读框大小为460bp,测序比对显示序列正确。转化BL21后,通过对不同克隆子表达水平的筛选,筛选到高表达IL-4的克隆子,表达和纯化后聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)显示,其融合蛋白大小约为28×103,与目的蛋白大小一致。Western blot鉴定结果显示表达的蛋白正确,为人IL-4目的蛋白。结论成功表达纯化到人IL-4重组蛋白。
- 王栩年四季邬于川高燕叶迎春袁青
- 关键词：纯化
- 重组IL-33融合表达载体的构建、蛋白表达及纯化被引量：2
- 2011年
- 目的:构建人白介素-33(IL-33)硫氧还蛋白融合表达载体,高效表达IL-33蛋白。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-33 cDNA;将扩增的IL-33目的基因与融合表达质粒pET102/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。结果:扩增的IL-33 cDNA大小为800bp左右。表达的IL-33融合蛋白大小为45kDa左右,Western blotting鉴定显示表达的蛋白正确,为IL-33目的蛋白。但表达的大部分蛋白为无生物学活性的包涵体,在后续对表达蛋白进行纯化的同时对蛋白进行了复性,得到了复性后具有生物学活性的IL-33蛋白。结论:成功制备了具有生物学活性的IL-33蛋白。
- 年四季张金平高燕杨燕向丽袁青
- 关键词：纯化
- 全人源scFv-Fc真核表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的:构建全人源抗IL-33 scFv-Fc重组载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表达并鉴定融合抗体蛋白。方法:RT-PCR扩增人IgG1 Fc段并插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1/Fc重组载体;将合成的信号肽(SP)序列插入重组质粒pcDNA3.1/Fc,构建重组pcDNA3.1/SP-Fc通用载体;最后将本实验室前期筛选的抗IL-33 scFv插入重组质粒pcDNA3.1/SP-Fc中,构建重组pcDNA3.1/SP-scFv-Fc载体,测序正确后转染CHO细胞。RT-PCR、Western blot检测目的基因的转录及表达。结果:重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小为1 560 bp左右。转染CHO细胞后,RT-PCR结果显示目的基因在CHO细胞中成功转录,Western blot显示表达的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清发生特异性免疫反应。结论:成功构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,以便于后续在CHO细胞中表达。
- 叶迎春年四季刘佳佳王栩高燕袁青
- 关键词：CHO细胞真核表达
- 免疫调节剂对哮喘的免疫治疗作用被引量：8
- 2011年
- 年四季张金平吴桐罗屏袁青
- 关键词：免疫治疗作用免疫调节剂哮喘慢性气道炎症性疾病抗原提呈细胞TH2型细胞因子
- 人源性治疗性抗体的应用与制备进展被引量：1
- 2013年
- 治疗性抗体在疾病的诊断和治疗方面具有重要意义。鼠源性单克隆抗体的临床应用受限于诱导产生人抗鼠抗体、亲和力低和半衰期短等,随着转基因小鼠和噬菌体展示技术的成熟,人源性治疗性抗体飞速发展,在肿瘤治疗、自身免疫性疾病的治疗、感染性疾病的治疗及减轻移植排斥反应、体内定位诊断、免疫调节等方面发挥重要作用。本文综述了治疗性抗体在肿瘤及免疫、移植等疾病中的治疗应用及人源性治疗性抗体的制备。
- 郭夕源杨江华邬于川袁青
- 关键词：单克隆抗体治疗性抗体人源性
