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国家重点基础研究发展计划(2004CB518800): 作品数：30 被引量：112H指数：6; 相关作者：夏家辉夏昆潘乾梁德生薛志刚更多>>; 相关机构：四川大学华西医院中南大学四川大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

利用核糖体基因区打靶载体靶向表达改造型人凝血因子Ⅷ被引量：4: 2005年; 构建了携带改造型hFⅧ(hFⅧ-BDDAK39)的核糖体基因区靶向表达载体pHrneo-BDDAK39,并将其转入人纤维肉瘤细胞(HT1080),检测其定点整合的能力及hFⅧ-BDDAK39的表达情况.结果显示,pHrneo-BDDAK39能够成功地将hFⅧ-BDDAK39靶入到HT1080细胞的核糖体基因区,定点整合效率达到2.0×10^(-5),并且靶入的hFⅧ-BDDAK39能有效表达,表达量为(32±5)ng·10~6细胞^-1·24h^(-1).这为利用此靶向表达载体进行血友病A的基因治疗提供了重要的实验依据.; 刘雄昊刘慕君佘华文路薛志刚梁德生蔡芳潘乾龙志高邬玲阡戴和平夏昆夏家辉; 关键词：靶向表达核糖体基因改造型打靶载体纤维肉瘤

硅纳米颗粒的生物毒理学研究被引量：8: 2006年; 目的:研究硅颗粒制成纳米颗粒后的长期毒性及生殖毒性。方法:将硅纳米颗粒经尾静脉注入小白鼠体内,收集尿液离心后,电镜下观察是否有纳米颗粒的存在,并将小白鼠雌雄合笼交配产生后代,观察其产仔率,同时在电镜下观察纳米颗粒在亲代鼠各脏器中的分布。结果:硅纳米颗粒进入小鼠体内后,分布于小鼠各脏器,并能经肾脏排泄,同时注入纳米颗粒的小鼠能正常的繁殖后代。结论:硅纳米颗粒没有毒性并能在体内使用。; 薛志刚朱晒红潘乾梁德生李玉梅刘雄昊夏昆夏家辉; 关键词：小鼠

防御素2融合VE-Cadherin重组质粒的抗血管生成免疫作用被引量：3: 2006年; 目的构建β防御素2(BD2)融合血管内皮钙粘附素(VE-Cadherin)胞外段重组质粒,以期探讨其免疫后抗肿瘤血管生成作用。方法PCR扩增成熟BD2片段和VE-Cadherin胞外段。以连接肽连接成熟BD2片段和VE-Cadherin胞外段,通过重叠PCR构建融合分子。将所得三种片段插入到pSecTag2B真核表达质粒。转染CT26肿瘤细胞,RT-PCR检测其表达。取转染COS细胞后的上清液做趋化实验,检测融合分子对树突状细胞(DC)的趋化作用。所得质粒经肌肉注射免疫小鼠后,皮下植入包裹CT26肿瘤细胞的藻酸盐微球,检测血管生成情况。结果测序证实三种质粒构建正确,能在真核细胞中顺利表达。BD2融合重组质粒和未融合的BD2质粒转染细胞后的上清液趋化DC的能力相近(P>0.05)。与其余各组质粒免疫相比,融合重组质粒免疫后能够显著抑制藻酸盐微球中肿瘤细胞诱导的血管生成(P<0.01)。结论BD2融合血管生成相关分子后的重组质粒免疫动物后能在体内有效地打破机体对肿瘤新生血管的免疫耐受。; 王国庆王永生王瑞吴杨杜小波徐建容刁鹏; 关键词：防御素血管生成免疫作用

以人皮肤成纤维细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞被引量：2: 2009年; 目的:比较人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)与小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)的增殖能力及研究人皮肤成纤维细胞作为饲养层支持人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)未分化生长的能力。方法:利用组织贴壁法从人皮肤中分离出HDFs,通过细胞形态的观察和生长曲线的绘制比较HDFs与MEFs的体外增殖能力。将HDFs作为饲养层细胞与hESCs共培养,传代12代后,检测hESCs碱性磷酸酶(AKP)、表面特异性标志及胚胎干细胞特异性转录因子。结果:HDFs可连续传代培养15代以上,10代以下的HDFs增殖迅速,而MEFs自第4代起,增殖能力就明显下降;hESCs在HDFs饲养层上可传代培养12代以上,克隆边界清晰,细胞排列紧密,碱性磷酸酶、表面标志物检测均呈阳性,表达了hESCs特异性转录因子。结论:HDFs比MEFs具有更强的增殖能力;HDFs可作为培养hESCs的饲养层细胞。; 杨俊林刘雄昊喻姣玲冯劢谭杨李卓吴奔高庭潘盛邬玲仟梁德生夏家辉; 关键词：人胚胎干细胞人皮肤成纤维细胞饲养层细胞

模式生物——爪蟾在生物医学上的应用被引量：5: 2006年; 随着生物医学的发展,模式生物——爪蟾研究系统在生物医学研究领域的应用越来越广泛．与其他模式生物相比,模式生物——爪蟾具有许多不可比拟的优点,适合建立多种人类疾病模型进行疾病发病机制和治疗等相关研究；还可以结合生物信息学分析进行高通量药物筛选及药物开发等研究；另外在发育生物学和基因功能研究方面也发挥重要作用．因此,爪蟾已经成为生物医学研究中的一种重要的模式生物,在医学基础及临床研究和药物筛选等研究领域中占有非常重要的地位．文中综述了爪蟾作为模式生物在生物医学研究中发挥的作用．; 来松涛魏于全邓洪新杨寒朔; 关键词：爪蟾模式生物生物医学疾病动物模型药物筛选模型

用原核增强子提高hTERT启动子介导的基因表达被引量：8: 2006年; 目的：探讨原核增强子能否提高hTERT启动子的转录活性及对其肿瘤特异性的影响。方法：将增强子SV40、CMV分别或组合构建一系列GFP和荧光素酶报告基因载体，转染人肝癌、鼻咽癌、宫颈癌、结直肠癌细胞、成纤维肉瘤和正常成纤维细胞，流式细胞仪计数和双荧光酶分析系统检测基因的表达效率。结果：在正常成纤维细胞中这些载体均不能有效表达；而在肿瘤细胞中hTERT启动子能介导基因表达但效率不高，增强子能使基因表达增强3～26倍，特别是单独CMV增强子和SV40-CMV双增强子使荧光素酶表达提高20-26倍，是常用的CMV增强子／启动子的2～7倍；完整CMV增强子／启动子对hTERT启动子的活性影响因不同细胞而异。结论：增强子能显著增强hTERT启动子的转录活性并对其肿瘤特异性没有影响，CMV增强子或SV40-CMV双增强子／hTERT启动子是高效特异的通用调控元件，用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力。; 王丽娜李卓薛志刚薛金锋胡友金周银李剑潘乾夏昆梁德生夏家辉; 关键词：端粒基因表达

斑马鱼crip2基因的克隆、亚细胞定位及在胚胎发育早期的表达分析: 2009年; 为揭示包含具有LIM结构域的crip基因的功能,以斑马鱼为实验对象,克隆了斑马鱼的crip2基因,并用全胚胎原位杂交法检测crip2在斑马鱼胚胎中的表达,用亚细胞定位法检测crip2基因在细胞中的定位.研究发现crip2基因在斑马鱼胚胎早期没有表达,五体节开始在脊索特异表达;后期,主要局限于在血管、心脏和体节间肌肉,表明crip2的表达并不局限于内皮系统.在细胞内,crip2基因在细胞核和胞浆中均有表达.; 解丽芳刘昌永姚少华杨寒朔; 关键词：斑马鱼亚细胞定位

Breast cancer-specific serum peptide profiles被引量：4: 2009年; Early detection of breast cancer is paramount to successful clinical therapy. Yet, early-stage breast cancer lacks specific symptoms or biomarkers. With the emerging of the mass spectrometric (MS) -based signatures as biomarkers, we investigated breast cancer-related serum profile pattern through class prediction and independent validation, and used Fourier transfer MS to identify breast cancer signature. We now show a distinctive serum peptide pattern that discriminates breast cancer from healthy controls with 93.2% sensitivity and 95.4% specificity. m/z 5901.70 and 4465.74 of ion fragment of FPA and alpha1-antichymotrypsin are found in the signatures that predominantly discriminate breast cancer from healthy individuals. These novel findings identify an MS-based serum peptide pattern of breast cancer that may have direct clinical utility in future.; WANG NaWEN XinYuWANG JieLI AiLingLI WeiHuaLI TaoLi YanZHANG XueMinWANG HongXiaYANG SongChengZHOU TaoGONG WeiLiTIAN YaPingHE Kun; 关键词：光谱测定法生物标记

乳腺癌血清多肽图研究被引量：1: 2009年; 乳腺癌一直是全世界范围内威胁妇女健康的恶性疾病,尽管人们已经进行了大量的研究以减少乳腺癌对人类的危害,但是乳腺癌仍然是目前导致死亡的恶性肿瘤之一.乳腺癌的早期发现对于患者的愈后与生存意义重大，可以明显提高病人生存时间、降低病人的死亡率．据统计，在过去的5年里，早期诊断每年可减少3．2％因乳腺癌死亡的患者．然而研究表明，目前常用的乳腺癌诊断技术，如乳腺X射线摄影和乳房检查均无法诊断出40％的早期乳癌患者和大多数年轻女性的乳腺肿瘤．因此在乳腺癌临床治疗中，急需发展新型的高效诊断技术．; 王娜温新宇王杰李爱玲李卫华李涛李燕张学敏王红霞杨松成周涛巩伟利田亚平何昆; 关键词：乳腺癌血清恶性肿瘤 X射线摄影死亡率

表达双功能融合蛋白(sCAR-EGF)腺病毒载体的构建及其活性检测: 2006年; 为了提高腺病毒载体用于基因治疗的靶向性,采用PCR和体外连接的方法构建了柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackievirus-AdenovirusReceptor)胞外段sCAR和表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)EGF融合基因,然后将此融合基因插入穿梭质粒pDC315。利用Ad-MAX腺病毒系统,将重组质粒pDC315-sCAR-EGF与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE13cre共同转染AD-293细胞,成功包装出一种复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-sCAR-EGF。经PCR鉴定该病毒含有sCAR-EGF融合基因片段,Westernblotting证实该病毒能表达sCAR-EGF融合蛋白。体外试验证实该病毒感染细胞所产生的融合蛋白能够引导携带报告基因的腺病毒Ad5-CMV-luc高水平感染肿瘤细胞,为高水平表达EGFR的肿瘤的靶向性基因治疗提供了新的手段。; 任鹏康王丰李惠明李宗海黄倩; 关键词：腺病毒表皮生长因子受体基因治疗

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