国家重点基础研究发展计划(2004CB518805)
- 作品数：24 被引量：110H指数：6
- 相关作者：杨安钢贾林涛王成济鲍炜孟艳玲更多>>
- 相关机构：第四军医大学四川大学华西医院第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 生精相关基因Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达和定位研究
- 2014年
- 目的:应用小鼠Znf230多克隆抗血清,对Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达及定位进行研究。方法:用RT-PCR分析、Western blot检测、免疫组织化学和免疫荧光染色方法研究Znf230在小鼠不同发育阶段睾丸组织及精子中的表达及亚细胞定位情况。结果:小鼠从出生到成年的发育过程中,Znf230的表达水平基本上是稳定的。小鼠出生6 d和12 d时,该蛋白在精原细胞核中表达,从出生18 d到精子发育成熟这个阶段,该蛋白转移到圆形精子细胞、延长精子细胞和精子中表达,具体定位于顶体区域和精子的尾部。结论:Znf230可能在小鼠生精过程中起着重要的作用。
- 宋红霞张思仲
- 重组抗HER2 ScFv／tBid基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用
- 2006年
- 目的:构建重组抗HER2 ScFv／tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。方法:将重组抗HER2 ScFv／tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT- PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。结果:转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv／tBid表达后有促凋亡作用。结论:重组抗HER2 ScFv／tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。
- 王芳王立锋裘秀春许彦鸣鲍炜孟艳玲王成济范清宇杨安钢
- siRNA抑制HER2/neu过表达肺腺癌细胞生长和增殖
- 2006年
- 背景与目的:30%NSCLC存在HER2/neu过表达,与肿瘤发生、转移、肿瘤血管形成、抗凋亡及化疗耐药等有关。本文通过RNA干涉抑制肺腺癌细胞SPC-A-1 HER2/neu过表达,观察肿瘤细胞周期、增殖及集落形成能力的变化。方法:构建针对HER2/neu的siRNA重组质粒,稳定转染SPC-A-1,通过RT-PCR和W esternB lot检测HER2/neu表达;FCM分析细胞周期;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;平板集落形成实验检测肿瘤细胞的集落形成能力。结果:成功构建了HER2/neu的siRNA重组质粒,稳定转染靶细胞后可显著降低HER2/neu表达;与亲代细胞相比,G0/G1期细胞增加17.1%,S期细胞减少12.8%;细胞生长速度减慢,集落S1抑制率达到49.0%。结论:针对HER2/neu的siRNA可以显著降低肺腺癌细胞过表达HER2/neu,肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,造成细胞增殖减慢,集落形成能力明显下降。因此,siRNA对过表达HER2/neu肺癌的治疗具有潜在应用价值。
- 任新玲钱桂生付海京鲍炜王涛张瑞张立红贾林涛杨安钢
- 关键词：SIRNAHER2/NEU肺腺癌集落形成
- 容量调控氯通道基因siRNA表达载体的构建及其沉寂效应检测被引量：2
- 2005年
- 目的:构建针对容量调控氯通道基因(CLC3)的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对CLC3基因的干扰作用.方法:设计CLC3靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPER载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体转染法转染胃癌细胞SGC7901,通过RT PCR、间接免疫荧光检测CLC3基因表达水平的变化.结果:把针对CLC3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pSUPER载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确,稳定转染人胃癌细胞SGC7901后,RT PCR、间接免疫荧光检测表明,CLC3基因的表达水平明显降低.结论:构建了针对CLC3基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制CLC3基因表达.
- 张勇贾林涛李庆霞王成济周士胜杨安钢
- 关键词：RNA干扰胃肿瘤
- 针对尿激酶型纤溶酶原激活剂的siRNA的载体构建与表达
- 2005年
- 目的:构建针对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)mRNA的siRNA的表达载体,并观察其对转染细胞中的uPA表达的抑制作用.方法:化学合成用于产生针对uPA的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSU PER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序.把构建的载体转染乳腺癌细胞系MDA MB231,观察其对uPA的干扰作用.结果:限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对uPA的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA能够有效的下调uPA的表达.结论:成功的构建了针对uPA的发卡状RNA表达载体,为进一步研究uPA的功能和肿瘤的基因治疗打下基础.
- 黄红艳孙强刘家云李庆霞鲍炜贾林涛王成济杨安钢
- 关键词：SIRNARNA干扰尿激酶型纤溶酶原激活剂
- 靶向EGFR的RNA干扰诱导非小细胞肺癌细胞A549凋亡的研究被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的靶向EGFR基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549的凋亡诱导作用。方法:构建靶向人EGFR基因的表达shRNA的质粒(pShEGFR),转染A549细胞,应用RT-PCR分析EGFR mRNA的表达情况,采用MTT法检测A549细胞的生长状况,通过流式细胞仪以及PI染色法进行细胞凋亡的定量检测和形态学分析。结果:pShEGFR转染组A549细胞中EGFR mRNA的表达水平,较转染同一载体连接无关序列的对照组(pShNEG组)、单纯脂质体组及PBS阴性对照组A549细胞均明显降低,F=425.640,P=0.000,其中较PBS阴性对照组细胞降低了74.5%。转染pShEGFR的A549细胞与3种不同对照组细胞相比,生长受到明显抑制,F=107.428,P=0.000,生长抑制率达54.9%,而转染pShNEG组和单纯脂质体组的A549细胞生长抑制率则分别为20%和3.1%。流式细胞仪检测结果显示,pShEGFR组细胞存在32.8%的凋亡率,PI荧光染色可见pShEGFR组细胞呈现出典型的凋亡形态学变化。结论:质粒介导的靶向人EGFR基因的pShEGFR能够有效地干扰NSCLC细胞系A549中EGFR基因的表达,进而抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡。
- 游佳赵新宇陈县城徐宁邓洪新
- 关键词：RNA干扰细胞凋亡
- hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用被引量：7
- 2005年
- 目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况.结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢.结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.
- 赵英任君琳孟艳玲张瑞马龙洋鲍炜王成济杨安钢
- 关键词：RNA干涉端粒酶HELA细胞
- 弗林蛋白酶:一种广泛参与前体蛋白切割的内切蛋白酶被引量：10
- 2006年
- 弗林蛋白酶(Furin)是真核生物细胞中一种重要的内切蛋白酶。Furin能识别特定的氨基酸序列,在内质网-高尔基体中经两次自剪切活化后,对分泌途径中许多重要的多肽和蛋白的前体进行剪切加工,使之具有生物活性。Furin底物广泛,包括大多数的肽类激素、许多生长因子、受体、黏附分子、基质金属蛋白酶和某些病毒包装糖蛋白以及细菌外毒素,因此具有重要的生物学功能,并与许多疾病的发生发展有密切的关系。
- 王涛赵晶杨安钢
- 关键词：前体蛋白
- HER2 siRNA抑制肺癌细胞增值的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的构建针对HER2的RNA干涉载体,观察对HER2表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响。方法设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pcD-NA3质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2的肺腺癌细胞系SPC-A-1,RT-PCR检测HER2的mRNA表达,Western Blot和间接免疫荧光法检测HER2的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长。结果成功构建了HER2特异性RNA干涉载体pcDNA3～siHER2;瞬时转染SPC-A-1细胞,HER2的mRNA及蛋白表达均降低;G_1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P<0.05)。结论成功构建了HER2 RNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPC-A-1 HER2的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G_1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段。
- 任新玲钱桂生付海京鲍炜杨安钢
- 关键词：SIRNARNA非小细胞肺癌
- 肿瘤坏死因子α通过激活NF-κB信号通路加快肝细胞周期进程被引量：41
- 2007年
- 在慢性炎症部位有易发肿瘤的倾向,大约有20%的恶性肿瘤发生与慢性炎症相关,肝细胞癌是世界第三大癌症死亡病因,其患者多数有慢性炎症病史,当炎症慢性迁延,肝细胞癌发生率明显增加.但慢性炎症与肿瘤发生与发展的细胞和分子机制仍然不清楚.利用人肝细胞株L-02细胞,研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对细胞周期的影响及其机制,并探讨核因子κB(NF-κB)和ERK1/2活化对细胞周期的影响,以期能更确切地阐明炎症介质TNF-α在肝细胞癌发生发展中的作用.发现TNF-α能促进肝细胞从G0/G1期向S期转换.蛋白质印迹检测表明,TNF-α能以剂量依赖方式诱导cyclinD1表达,而对cyclinE的表达无明显影响.同时TNF-α能激活NF-κB,ERK1/2,抑制NF-κB活化降低了TNF-α诱导的cyclinD1表达,导致细胞周期阻滞于G0/G1期.抑制ERK1/2活化则对细胞周期和cyclinD1表达无显著影响.结果提示,TNF-α通过活化NF-κB信号通路,诱导cyclinD1表达,加快细胞周期进程,这可能是促进肿瘤的发生发展重要机制.针对TNF-α和NF-κB的治疗可能延长慢性炎症相关性肿瘤的潜伏期和抑制肿瘤的发展.
- 杨季云张思仲郭红曾祥元马布仁
- 关键词：慢性炎症肿瘤发生
