国家自然科学基金(81170439)
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
- 相关作者：李园周斌陈珂玲周总光谢红更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院四川大学德阳市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 糖原合酶激酶3β在轻型/重症急性胰腺炎细胞模型中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨糖原合酶激酶3β（GSK3β）在轻型/重症急性胰腺炎发病中的表达及作用方法 采用单独雨蛙素、雨蛙素联合脂多糖刺激分别构建轻型急性胰腺炎（MAP）和重症急性胰腺炎（SAP）的细胞模型,分别在2、4、8、12、24 h收集细胞培养基上清,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡率及坏死率,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测GSK3β及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3、-8、-9 mRNA表达变化.结果 雨蛙素组和雨蛙素＋脂多糖组各时间点淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6较对照组均增高,且在大多数时间点,雨蛙素＋脂多糖组组比雨蛙素组水平更高,开始上调时间相同或更早（P＜0.05）.刺激24 h后,雨蛙素组凋亡率[（19.2±0.9）％]显著高于雨蛙素＋脂多糖组[（10.2±0.5）％,P ＜0.05].雨蛙素组坏死率[（5.8±0.3）％]显著低于雨蛙素＋脂多糖组[（13.6±0.7）％,P＜0.05].SAP组的坏死/凋亡比值是MAP组的5倍.GSK3β的mRNA水平在雨蛙素组中是2h短暂下调[相对表达量为（0.5±0.1）倍]后于8h显著上升[相对表达量为（3.0±1.1）倍,P ＜0.05],然后又逐步下降;而在雨蛙素＋脂多糖组中则是是8h才缓慢上调[相对表达量为（1.8±0.6）倍,P＜0.05],至24 h达到高峰[相对表达量为（3.6±0.3）倍,P＜0.05].GSK3β和Caspase-3 mRNA水平均有升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 采用单独雨蛙素、雨蛙素联合脂多糖刺激分别建立MAP和SAP细胞模型可行;GSK3β在MAP和SAP中可能通过促进腺泡细胞凋亡来起作用.
- 周斌刘勇陈珂玲余江李园
- 关键词：糖原合酶激酶3Β急性胰腺炎细胞模型凋亡
- 髓样分化因子88酵母双杂交诱饵质粒构建及鉴定
- 2017年
- 髓样分化因子88（MyD88）是Toll样受体信号通路中的一个关键接头分子。我们构建MyD88蛋白酵母双杂交诱饵质粒，用于筛查与其相互作用的蛋白。一、材料与方法1．分子克隆：通过反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）获得MyD88片段，PCR产物及pGBKT7质粒分别采用NdeI和EcoRI进行双酶切并纯化后，16℃连接过夜后转化大肠杆菌，进行双酶切和测序鉴定。
- 周斌李园
- 关键词：髓样分化因子88酵母双杂交质粒构建MYD88受体信号通路
- 早期机械通气及全氟化碳气化吸入对重症胰腺炎患者炎性因子水平影响被引量：8
- 2013年
- 目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者应用早期机械通气联合全氟化碳气化吸入的临床疗效。方法 34例SAP合并ARDS患者接受早期机械通气及全氟化碳气化吸入治疗(观察组),34例接受单纯行早期机械通气治疗(对照组),观察两组临床疗效,氧合指标(PaO2/FiO2),白细胞介素(IL)-1、6、8,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的差异。结果观察组总有效率(94.12%)显著优于对照组(76.47%)(P<0.05)。治疗后,观察组动脉血氧分压饱和度(SaO2)、动脉血氧分压(PaO2)、PaO2/FiO2显著上升,且高于对照组(P<0.05)。治疗后观察组IL-1、6、8,TNF-α显著低于对照组(P<0.05)。结论早期机械通气联合全氟化碳气化吸入能有效控制SAP合并ARDS患者炎性反应的发生,提高治愈率。
- 谢红李园
- 关键词：早期机械通气全氟化碳胰腺炎
- 骨髓间充质干细胞旁分泌因子治疗重症急性胰腺炎的潜能被引量：10
- 2015年
- 骨髓间充质干细胞(BMSC)移植是重症急性胰腺炎(SAP)治疗的研究热点。但在临床应用中,该治疗方式却遇到了诸多技术及伦理问题。BMSC的旁分泌因子具有与细胞移植同样的疗效,且可减少上述生物安全问题,具有更安全、更易操控的治疗优势。本文就BMSC旁分泌因子在SAP中的治疗潜能作一综述,注射含旁分泌因子的BMSC培养上清有望成为未来SAP细胞治疗的新策略。
- 陈珂玲周总光周斌李园
- 关键词：重症急性胰腺炎骨髓间充质干细胞
- 人胚肾细胞株对脂多糖刺激的反应及关键基因的表达
- 2017年
- 人胚肾细胞株是研究Toll样受体（TLR）最常使用的细胞。为更好地认识其特性，我们进行了相关研究。一、材料与方法1．细胞培养及反转录一聚合酶链反应（1it—PCR）：人胚肾细胞株293T、293A、HEK293采用杜尔伯科改良伊格尔培养基（DMEM）进行常规培养，总RNA抽提后行RT—PCR，引物均为自行设计。
- 周斌陈珂玲李园
- 关键词：人胚脂多糖TOLL样受体HEK293
- 茎环法通用探针定量检测成熟型微RNA方法的建立
- 2017年
- 目的 建立通用型荧光探针用于不同成熟型微RNA的定量检测.方法 基于茎环法发明者发明且目前应用最为广泛的茎环框架,采用Primer Premier 5.0软件在其茎环框架内部设计了一通用的荧光探针及不同的引物对.采用以上探针和引物对对hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p和hsa-miR-486-5p进行定量检测.结果 结果表明该通用型荧光探针可用于不同成熟型微RNA（hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p,hsa-miR-486-5p）的定量检测.结论该通用型探针可用于茎环法定量检微RNA,可让定量更加准确、实验成本更低.理论上该探针可以用于所有的成熟型微RNA进行荧光定量PCR检测.
- 周斌黄理宾谢旭琴李园
- 关键词：微RNAS聚合酶链反应荧光抗体技术
- Toll样受体4基因突变体过表达慢病毒的构建及鉴定
- 2018年
- Toll样受体4（TLR4）基因2287T突变体则是我们在中国人中鉴定发现的一种有义突变，为研究该突变体的功能，我们构建了其过表达慢病毒及稳定表达细胞株。
- 周斌周总光吕兆瑛陈珂玲李园
- 关键词：TOLL样受体4基因突变体慢病毒过表达
- TLR4通路关键蛋白MyD88在坏死性小肠结肠炎发病过程中的作用机制研究被引量：7
- 2015年
- 目的探究以MyD88为关键传导分子的TLR4下游炎症-凋亡信号通路在NEC发病过程中的作用机制。方法采用SPF级，新生10日龄MyD88^-／-幼鼠和相应的野生型幼鼠，共32只，分别按照数字表法随机分配进入NEC实验组或对照组；NEC实验组幼鼠置入自制新生保育箱内造模处理（每日人工配置鼠乳代用品喂养，5次／d；每次给予N2缺氧90S后，快速充入O2复氧，再次置入4℃环境冷刺激10min，3次／d，连续3d；LPS10mg／kg稀释于0．1ml灭菌水中，去芯留置针头口腔插管灌胃，1次／d，连续3d）；对照组继续与母鼠同笼，鼠乳喂养。实验结束后取材回肠末端肠管组织，HE染色法组织病理评分及液相芯片细胞因子TNF-α及IL-1β检测判断各组肠道NEC炎症程度。TUNEL方法检测各组小鼠肠道细胞的凋亡水平变化。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测各组小肠组织内TLR4炎症-凋亡通路中TRIF、IRF-3、NF-κb、Bax、Bcl-2、Caspases的mRNA表达情况。结果与野生鼠NEC组相比，MyD88敲除鼠小肠炎症程度评分（1．63±0．52比2．75±0．46）、炎症效应分子NF_小表达（1．38±0．25比2．33±0．76）、促炎因子IL-1β（465．57±81．59比863．58±198．28）、TNF-α（5．41±0．83比6．48±1．15）水平明显降低；肠上皮细胞凋亡明显减少（4．44±0．47比9．75±1．00），凋亡效应分子Caspases 8（2．03±0．20比4．06±0．44）、Caspases 9（1．02±0．08比1．93±0．09）、Caspases 3（1．87±0．28比6．75±1．12）和促凋亡基因Bax（1．15±0．25比2．40±0．42）表达降低（P〈0．05）。MyD88非依赖通路中关键因子TRIF（1．85±0．38比1．4±0．19）和IRF-3（2．01±0．41比1．53±0．38）表达上调（P〈0．05）；抗凋亡基因Bcl-2（1．18±0．31比1．10±0．20）表达无变化（P〉0．05）。结论①TLR4下游的MyD88-NF-κb信号通路是NE
- 杨国柱周寅吕兆瑛周斌陈珂玲王奕姚龙沛李园
- 关键词：小肠结肠炎坏死性
- 人结直肠癌细胞株研究及使用现状被引量：1
- 2015年
- 结直肠癌细胞株是研究结直肠肿瘤癌变、浸润转移机制、探寻新的治疗药物及策略的理想模型。然而，目前存在结直肠癌细胞株数目众多、质量参差不齐以及研究者对其生物学特性重视不足等众多问题，导致结直肠癌研究中对细胞株的选择及使用不规范，影响实验结果的准确性，甚至可能得出错误结论。本文对迄今已建立的人结直肠癌细胞株进行整理分类，从其建立和应用、分类与选择、使用现状与存在问题3方面进行总结。
- 陈珂玲吕兆瑛周总光李园
- 关键词：结直肠肿瘤细胞株
