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重组抗血小板多肽在Cos-7细胞中的表达、纯化和活性检测: 2011年; 目的克隆并在Cos-7细胞中表达有活性的抗血小板多肽。方法合成编码抗血小板多肽赖氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(KGD)的核苷酸序列并克隆于pCDNA3.1/myc-hisB载体,构建重组表达载体pcD-NA3.1-KGD。以lipofectamine 2000将重组表达载体转染Cos-7细胞,G418筛选抗性细胞克隆。裂解细胞并抽提胞内蛋白,采用融合表达的myc多肽表位抗体,通过Western blot检测目的蛋白的表达。大量扩增高表达KGD融合蛋白的抗性细胞克隆,ProBondTM系统纯化KGD融合蛋白。应用血小板凝聚仪和应用流式细胞仪测定KGD多肽抗血小板活性。结果成功构建KGD表达载体pcDNA3.1-KGD,该载体转染Cos-7细胞经G418筛选获得5株抗性细胞克隆,Western blot显示其中2株细胞很好表达KGD融合蛋白。ProBond试剂纯化KGD融合蛋白,获得纯度为94.6%的融合蛋白。KGD均能通过占据GPⅡb/Ⅲa受体而抑制血小板聚集。结论在Cos-7细胞中可大量表达并获得高纯度有活性的抗血小板多肽KGD融合蛋白。; 郭延松蔡鹏威林皓平伍严安; 关键词：基因克隆 COS-7细胞流式细胞仪

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福建省农科院青年科技人才创新基金(2003J049)