广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0731035)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 相关作者：陈秀荔李咏梅陈晓汉蒋伟明彭敏更多>>
- 相关机构：广西水产研究所广西兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西省自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 对虾WSSV病毒VP281基因的siRNA筛选研究
- 2011年
- 构建一个对虾WSSV VP281基因的siRNA筛选体系,获取有效siRNA,为进一步开展siRNA抗WSSV研究建立基础。根据已报道的VP281基因编码序列,设计并合成一对引物,扩增出带双酶切位点的VP281。对VP281和质粒pEGFP-C1分别酶切后进行连接,获取表达载体pEGFP-VP281。利用专业软件设计3对靶向VP281的siRNA(VP281-siRNA1﹑VP281-siRNA2﹑VP281-siRNA3),并合成siRNA,将3种siRNA分别与pEGFP-VP281共转染PK细胞。采用Western blot方法检测GFP-VP281融合蛋白的表达,半定量RT-PCR方法检验siRNA抑制VP281基因转录的效果。结果显示,pEGFP-VP281可在BHK细胞正常表达融合蛋白GFP-VP281。3对siRNA对GFP-VP281的mRNA转录均有不同程度的干扰效果,siRNA2的干扰效果最为显著。构建针对WSSV-VP281基因的siRNA筛选体系,初步验证了该系统的有效性,为开展siRNA抗WSSV研究建立了基础。
- 黎铭陈晓汉陈秀荔彭金霞马春霞蒋伟明彭敏赵永贞杨春玲李咏梅
- 关键词：对虾WSSVRNA干扰
- 多重RT-PCR方法在凡纳滨对虾病毒检测中的应用
- 2009年
- 病毒检测在预防和控制对虾病毒性疫病实践中具有重要的作用和意义。为了提高对虾病毒检测的快速性和简便性,建立了一种可同时检测6种对虾病毒的RT-PCR方法,并利用该方法对来自广西沿海地区的130份病虾样品中的黄头病毒(YHV)、白斑综合征病毒(W SSV)、桃拉病毒(TSV)、肝胰腺坏死病毒(HPV)、传染性皮下组织坏死病毒(IHHNV)以及杆状病毒(MBV)进行了检测。检测结果:白斑综合征病毒发病率最高,检出率高达73.8%;传染性皮下组织坏死病毒发病率为18.5%;桃拉病毒检出率为3.1%;未检出黄头病毒、肝胰腺坏死病毒和杆状病毒。该RT-PCR方法扩增得到的片段经测序,结果与标准毒株的核酸数据高度吻合。实践证明,该实验建立的RT-PCR方法具有高度的准确性,与其他检测方法相比具有快速、简便的特点,在对虾病毒检疫、流行病学调查等方面具有重要的应用价值。
- 黎铭李咏梅熊建华陈秀荔蒋伟明曾地刚彭敏杨春玲马宁陈晓汉
- 关键词：对虾病毒检测多重RT-PCR
- 对虾白斑病毒VP15基因的RNA干扰体外研究
- 2010年
- VP15是南美白对虾WSSV病毒的一个核衣壳蛋白基因。采用体外干扰实验筛选对VP15具有针对性的siRNA。实验构建了真核表达载体pEGFP-VP15,并将设计的siRNA以及pEGFP-VP15共转染BHK细胞。采用Western blot方法检测GFP-VP15融合蛋白的表达,半定量RT-PCR方法检验siRNA抑制VP15基因转录的效果。实验结果表明,pEGFP-VP15在PK细胞正常表达,设计的3对siRNA对GFP-VP15的mRNA转录均有不同程度的干扰效果;其中,siRNA1的干扰效果最为显著。实验结果为下一步对虾体内干扰WSSV病毒复制研究以及筛选更多的特异siRNA建立基础。
- 黎铭陈晓汉马春霞蒋伟明马宁熊建华彭金霞陈秀荔彭敏曾地刚李咏梅
- 关键词：WSSVRNA
