国家自然科学基金(31060359)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：江西师范大学江西农业大学南昌大学更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析被引量：4
- 2017年
- 对三角帆蚌HSP70基因序列进行全长克隆及其分子生物学分析,并检测其在不同水温刺激下鳃组织中的表达变化。通过高通量转录组测序获得三角帆蚌HSP70基因(Hc HSP70)长片段,采用3′RACE对其进行了3′末端克隆,经拼接得到Hc HSP70 c DNA全长序列。采用多种分子生物学软件对Hc HSP70 c DNA全长序列进行了特征分析,采用实时荧光定量PCR技术检测了其组织分布,并结合Western-blot技术检测蚌鳃中该基因m RNA与蛋白经不同水温刺激后的表达变化。结果显示,Hc HSP70 c DNA全长为2298 bp,其中开放阅读框为1974 bp,编码657个氨基酸。预测分子量大小为71.6 Ku,p H7.0时的理论等电点为5.61。氨基酸序列分析表明,Hc HSP70氨基酸序列含HSP70家族的3个标签序列(I9DLGTTYS16、I197FDLGGGTFDVSIL210和I336VLVGGSTRIPKVQK350),与长牡蛎及泥蚶的HSP70同源性最高(91%)。实时荧光定量PCR检测结果显示,Hc HSP70在鳃、性腺、肝胰腺、外套膜及肌肉等5种被检组织中均有表达,以肝胰腺中的表达水平最高。实时荧光定量PCR与Western-blot技术检测皆表明,蚌鳃组织中Hc HSP70基因与蛋白的表达量在37℃时达到最高,而在40℃水温刺激下表达水平下调至正常值,表明其在适应高温刺激时发挥了重要作用。
- 吴圣楠隗黎丽李海军付建平刘毅
- 关键词：三角帆蚌热休克蛋白70基因表达
- 三角帆蚌短型肽聚糖识别蛋白S3基因克隆及表达分析
- 2016年
- 肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是机体先天免疫系统中的重要模式识别受体,研究对三角帆蚌的一种短型肽聚糖识别蛋白进行了克隆与表达分析。研究采用5′、3′RACE技术,对高通量转录组测序所得三角帆蚌PGRPS3基因(hc PGRPS3)片段分别进行了5′,3′末端克隆,经拼接得到hc PGRPS3 c DNA全长序列。采用多种分子生物学软件对hc PGRPS3 c DNA全长序列进行了特征分析,实时荧光定量(q RT-PCR)检测了其组织分布,及经肽聚糖(Peptidoglycan,PGN)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后其在肝胰腺中的基因表达变化。hc PGRPS3 c DNA全长1438 bp,开放阅读框为858 bp,编码285个氨基酸,预测分子量大小为32.3 ku,p H 7.0时的理论等点为7.98。序列中不存在信号肽与跨膜结构。氨基酸序列保守性分析表明,其他物种短型PGRP中,以夏威夷短尾鱿PGRP4与hc PGRPS3同源性最高(51%)。q RT-PCR检测结果显示,hc PGRPS3在性腺及肝胰腺中表达水平较高。经PGN或LPS刺激后,肝胰腺中hc PGRPS3表达水平显著上调,表明hc PGRPS3可能在机体抗菌免疫反应中发挥重要作用。
- 李海军张建强吴圣楠隗黎丽刘毅
- 关键词：肽聚糖识别蛋白三角帆蚌基因克隆基因表达
- 三角帆蚌热休克蛋白60基因克隆及其表达分析被引量：5
- 2014年
- 利用3′RACE技术,对高通量转录组测序所得三角帆蚌HSP60基因(hcHSP60)长片段(2629 bp)进行了3?末端克隆,经拼接得到hcHSP60 cDNA全长序列。采用多种分子生物学软件对hcHSP60 cDNA全长序列进行了特征分析,并采用RT-PCR技术检测了其组织分布及经冷热应激后的表达变化。结果显示,hcHSP60cDNA全长为2807 bp,其中开放阅读框为1707 bp,编码568个氨基酸,预测分子量大小为61.04 ku,pH 7.0时的理论等电点为5.63。序列中不存在信号肽与跨膜结构。氨基酸序列保守性分析表明,hcHSP60氨基酸序列与光滑双脐螺HSP60同源性最高(达82%),而与牙鲆、白云金丝鱼HSP60的同源性最低(为75%)。RT-PCR检测结果表明,hcHSP60在肝胰腺中的表达水平最高,而在血液中的表达水平最低。30℃与35℃水温处理三角帆蚌4h后,各组织中hcHSP60表达水平明显上升,表明hcHSP60可能在三角帆蚌耐热应激反应中起着重要作用。
- 吴圣楠刘大伟刘毅胡宝庆张建强王艳王婷
- 关键词：三角帆蚌热休克蛋白60
