福建省自然科学基金(2010J01176)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：陈勇杨晓煜蔡泽骏更多>>
- 相关机构：福建医科大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 干扰原代Leydig细胞糖皮质激素受体表达的重组腺病毒构建研究
- 2011年
- 目的:获得可对原代大鼠Leydig细胞的糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)产生干扰作用的含miRNA的重组腺病毒。方法:首先设计并构建针对大鼠GR基因的4对miRNA表达载体,将此4种miRNA表达载体经脂质体转染大鼠胚胎成纤维细胞(Rat embryonic fibroblast,REF),Western blot分析GR的表达变化,筛选出干扰效果最佳的miRNA表达质粒。其次通过BP重组和LR重组,构建重组腺病毒质粒。最后将重组腺病毒质粒转染293A细胞,包装扩增并检测腺病毒滴度,将合适滴度的重组腺病毒感染原代大鼠Leydig细胞,Western blot法检测重组腺病毒干扰原代大鼠Leydig细胞GR表达的效果。结果:重组腺病毒感染Leydig细胞的效率可达80%,与对照组相比,感染重组腺病毒的Leydig细胞,其GR蛋白表达显著减少。结论:本研究成功构建重组腺病毒,证实其对原代大鼠Leydig细胞中GR的表达具有特异性干扰效应。
- 陈勇
- 关键词：糖皮质激素受体RNA干扰重组腺病毒LEYDIG细胞
- Leydig肿瘤细胞中GR表达量改变与皮质酮诱导的细胞凋亡的相关性
- 2011年
- 目的以小鼠Leydig肿瘤细胞(MLTC)为细胞模型,探讨细胞中糖皮质激素受体(GR)表达量改变与应激水平皮质酮(CORT)诱导的细胞凋亡的相关性。方法 GR过表达实验分为GR质粒组、空载质粒组和空白对照1组,采用基因克隆技术使GR质粒组MLTC中的GR呈过表达状态,Western blotting检测验证;GR低表达实验分为空白对照2组、脂质体对照组、GRsiRNA组和对照siRNA组,采用RNA干扰技术使GR siRNA组MLTC中的GR呈低表达状态,Western blotting检测验证。以应激水平的CORT(终浓度200 nmol/L)处理两种实验分组的MLTC(GR过表达+CORT组、空载质粒+CORT组、空白对照1组和GR低表达+CORT组、对照siRNA+CORT组、空白对照2组),分别以CORT处理的空白对照1、2组MLTC作为单纯CORT处理1、2组;流式细胞术检测各组MLTC细胞凋亡率,分析GR表达与细胞凋亡率的相关性。结果 GR过表达+CORT组、空载质粒+CORT组、单纯CORT处理1组和空白对照1组的细胞凋亡率分别为(36.6±0.6)%、(23.8±0.8)%、(24.3±0.6)%和(4.1±0.5)%,GR过表达+CORT组细胞凋亡率显著高于其他各组(P<0.01);GR低表达+CORT组、对照siRNA+CORT组、单纯CORT处理2组和空白对照2组的细胞凋亡率分别为(12.2±0.6)%、(22.5±0.6)%、(22.3±0.9)%和(4.1±0.5)%,;GR低表达+CORT组细胞凋亡率显著低于对照siRNA+CORT组和单纯CORT处理2组(P<0.01)。MLTC中GR表达量与细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.947,P<0.05)。结论 Leydig细胞中GR表达量的改变与应激水平CORT诱导的细胞凋亡率改变呈显著正相关,由应激导致的Leydig细胞凋亡可能是糖皮质激素直接作用的结果。
- 陈勇杨晓煜蔡泽骏
- 关键词：糖皮质激素受体皮质酮LEYDIG细胞
