国家自然科学基金(30400326)
- 作品数：14 被引量：37H指数：3
- 相关作者：马红霞刘玉堂伞治豪程培英丛薇更多>>
- 相关机构：吉林农业大学吉林出入境检验检疫局新疆农业职业技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省教育厅科研项目吉林省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 大肠杆菌多重耐药调控基因evgS的克隆及其原核表达被引量：2
- 2011年
- 以大肠杆菌ATCC25922的基因组为模板,根据GenBank中大肠杆菌的evgS基因序列设计引物,PCR扩增出约894 bp的基因片段,将所得片段与pMD18-T simple vector连接,转化至大肠杆菌JM109中,筛选阳性克隆,其质粒中插入序列测序结果与GenBank中报道一致。提取阳性克隆质粒,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,回收目的片段,定向克隆到pET-28a原核表达载体中,提取阳性质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,收集表达产物,通过SDS-PAGE分析证实,pET-28a-evgS可成功地在大肠杆菌中表达EvgS蛋白。Western-blot检测证明,表达产物具有良好的反应原性。
- 刘树明马红霞陈立芳刘玉堂
- 关键词：大肠杆菌克隆原核表达
- 临床分离动物源性大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平的测定
- 2010年
- 为研究大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平与不同动物源性大肠杆菌多重耐药水平之间的关系,将获得的重组阳性质粒pET28a(+)-acrA转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经IPTG诱导表达,得到约42ku的目的蛋白。AcrA蛋白表达产物经侧带法纯化后免疫獭兔,制备抗AcrA的多克隆抗体,采用间接ELISA法检测临床分离的31株不同动物源性大肠杆菌中acrA基因的表达水平。结果显示,随着多数被检大肠杆菌多重耐药水平的提高,AcrA蛋白的表达量有上调的趋势。表明,动物源性大肠杆菌的多重耐药水平与AcrA蛋白的表达水平可能存在相关性。
- 贾绍娟曹海涛马红霞
- 关键词：大肠杆菌多重耐药
- 不同动物源性大肠杆菌的耐药性检测被引量：5
- 2008年
- 马红霞贾绍娟刘玉堂高光
- 关键词：致病性大肠杆菌动物源耐药性大肠杆菌病感染性疾病
- 不同动物源性大肠杆菌多重耐药调控基因SoxS的同源性分析被引量：2
- 2008年
- 马红霞于晓颖刘玉堂伞治豪
- 关键词：抗生素耐药性大肠杆菌调控基因同源性分析动物源细胞膜通透性
- 乐果亚急性暴露对大鼠胆碱酯酶浓度及细胞色素P450亚型表达量的影响被引量：2
- 2006年
- 对6周龄雄性Wistar大鼠5次灌胃给予20%LD_(50)的乐果,观察给药后大鼠的毒性反应,每日测定实验鼠采食量、饮水量和体重。最后一次给药后第24 h,采用丁酰硫代胆碱法测定大鼠红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶浓度,并采用定量RT-PCR法检测大鼠肝中细胞色素P450基因8个亚型的表达量。结果表明,大鼠用药后不同时间内出现了有机磷药物中毒的典型症状,其采食量、饮水量和体重明显下降,红细胞、血清和脑组织中胆碱酯酶浓度均明显低于对照组,肝细胞色素P450的8个亚型中CYP2B1/2的表达量明显高于对照组。
- 马红霞王伟利李炳霞程培英
- 关键词：乐果亚急性毒性胆碱酯酶细胞色素P450
- 大肠埃希菌AcrAB-TolC外排泵表达水平调控机制的研究进展被引量：6
- 2008年
- AcrAB-TolC外排泵的过量表达是引起大肠埃希菌多重耐药的主要原因。AcrAB-TolC外排泵的表达水平主要受其正向调节因子、负向调节因子以及环境中的化学物质等调节。本文综述了近年来AcrAB-TolC外排泵调控因子方面的研究进展。
- 马红霞马述清刘玉堂伞治豪
- 关键词：大肠埃希菌耐药性外排泵
- 大肠杆菌多重耐药调控基因rob的原核表达及其表达蛋白多克隆抗体的制备
- 2010年
- 提取阳性克隆质粒pMD18-T-rob,经SacⅠ+XhoⅠ双酶切,回收目的片段,定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体中,提取阳性质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,收集表达产物,SDS-PAGE分析证实pET-28a-rob可成功地在大肠杆菌中表达出Rob蛋白。Western-blot分析证明,Rob蛋白具有良好的反应原性。表达出的Rob蛋白经侧带法纯化后免疫獭兔3次,制备抗Rob蛋白的多克隆抗体。通过间接ELISA方法检测抗体效价,结果表明抗体血清1∶40稀释时抗体效价较高。
- 陈立芳马红霞刘玉堂刘树明
- 关键词：大肠杆菌原核表达多克隆抗体
- 不同动物源性大肠杆菌多重耐药调控基因rob的同源性分析被引量：11
- 2007年
- 为研究大肠杆菌多重耐药调控基因rob与不同动物源性及多重耐药水平之间的关系,选取临床分离的不同动物源性大肠杆菌5株及大肠杆菌药敏质控株ATCC25922,在对其进行主要治疗药物耐药性检测的基础上,分别以其染色体DNA为模板,通过PCR反应扩增出大肠杆菌多重耐药调控基因rob,将该基因分别与克隆载体pMD18-T连接,连接产物转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,对经酶切与PCR反应鉴定为阳性的克隆质粒进行了核苷酸序列测定。测序结果表明:不同动物源性大肠杆菌的rob基因与Gen-Bank中该基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列的同源性较高。不同源性大肠杆菌的rob基因的核苷酸序列与其动物源性有关,该基因的核苷酸序列的个别突变位点可能影响AcrAB外输泵的表达水平,进而影响其多重耐药水平。
- 马红霞刘玉堂伞治豪
- 关键词：大肠杆菌多重耐药同源性分析
- 大肠杆菌多重耐药调控基因marR的克隆及其原核表达被引量：1
- 2010年
- 为获得MarR多克隆抗体，试验以大肠杆菌ATCC25922基因组为模板，根据GenBank中大肠杆菌的marR基因序列设计引物，PCR扩增出长约435bp的marR基因片段，将所得片段与pMD18-T载体连接，转化至JM109大肠杆菌中，筛选阳性克隆，其质粒中插入序列的测序结果与GenBank中报道一致，从阳性克隆中提取质粒，经BamHI和XhoI酶切回收435bp的目的片段，定向克隆到pET～28a（＋）表达载体中，提取阳性质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中获得阳性克隆。结果表明：经IPTG诱导阳性菌收集表达产物，通过SDS—PAGE分析证实marR基因得到表达；经Western—blot检测该蛋白具有良好的反应原性。
- 许皓马红霞马颖林雁春
- 关键词：大肠杆菌MARR克隆原核表达
- 乐果急性、亚急性暴露对大鼠胆碱酯酶及细胞色素氧化酶影响的研究被引量：2
- 2006年
- 对6周龄雄性SD大鼠分别单次灌胃给予50％（LD50）的乐果、连续5d灌胃给予20％（LD50）的乐果，观察给药后至屠宰前大鼠的急性、亚急性毒性反应。采用丁酰硫代胆碱法测定红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶；采用定量RT-PCR法测定试验大鼠肝脏中细胞色素氧化酶8个亚型的表达量。结果表明：供试大鼠用药后不同时间出现了呕吐、流泪、流涎、震颤等典型的有机磷药物中毒症状。红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶均明显降低，以试验组和对照组脑组织中胆碱酯酶差异最为显著，急性暴露组大鼠脑组织中的胆碱酯酶降低80．12％，亚急性＋暴露组大鼠脑组织中的胆碱酯酶降低93．13％。试验组大鼠细胞色素氧化酶中CYP2B1／2亚型的表达量明显增加。为对照组大鼠表达量的4～8倍。
- 马红霞程培英
- 关键词：乐果胆碱酯酶细胞色素氧化酶
