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CYP4G19基因表达水平对德国小蠊耐药性的影响: 2010年; 目的通过对细胞色素P450家族CYP4G19基因在德国小蠊耐药株和敏感株中表达水平的研究,初步探讨CYP4G19基因与德国小蠊耐药性的关系。方法用广口瓶内采用药膜接触法测定野生株和敏感株德国小蠊的耐药指数,RT-PCR比较野生株和敏感株德国小蠊CYP4G19基因表达,RNAi沉默德国小蠊CYP4G19基因,免疫组织化学法测定CYP4G19蛋白表达。结果深圳市现场采集野生性德国小蠊,用广口瓶药膜法测得其抗性指数为3.88,其抗药性显著高于敏感株(P<0.01);野生株CYP4G19 mRNA表达水平比敏感株显著上调(P<0.01);野生株CYP4G19基因沉默后CYP4G19蛋白表达明显下降,但仍然具有一定的抗药性。结论深圳市德国小蠊野生株对"家虫清"产生了一定的抗药性,对菊酯类杀虫剂产生抗药性的德国小蠊CYP4G19基因的转录、翻译表达水平均有上调。; 张起文赵霞黄达娜耿艺介高世同李晓恒张仁利; 关键词：德国小蠊细胞色素P450 RNA干扰

嗜人按蚊雌蚊差异表达基因的鉴定及全长cDNA的克隆: 嗜人按蚊(Anopheles anthropophagus)即雷氏按蚊(Anopheles lesteri)的同物异名,目前仅知分布于我国东经97°以东,北纬19-42°,是我国主要的传疟媒介,其传疟能力被证实为中华按蚊...; 叶勇刚赵以睿张仁利耿艺介黄达娜高世同林瑞庆朱兴全; 文献传递

应用rDNA-ITS2诊断性序列现场对3种重要蚊媒的鉴定被引量：3: 2008年; 目的建立利用核糖体DNA第二内转录间隔区(rDNA-ITS2)诊断性序列鉴别蚊媒的分子生物学方法。方法根据淡色库蚊、白纹伊蚊、嗜人按蚊rDNA-ITS2基因两侧的5.8S和28S保守区设计诊断性引物,进行3种蚊虫的rDNA-ITS2克隆鉴定,并利用其rDNA-ITS2特征进行现场蚊虫的鉴别。结果诊断性引物对于淡色库蚊、白纹伊蚊、嗜人按蚊DNA模板的扩增产物分别为440、514和558bp,3种蚊虫阳性克隆的测序结果与GenBank-blast相应蚊种rDNA-ITS2序列的同源性均为99%。用Biosept、DNAstar等软件分别分析发现各蚊虫克隆的个体间存在一定程度的单核苷酸多态性(SNP)。将现场采集的蚊虫诊断性引物扩增产物进行阳性克隆进行序列测定和分析,显示与淡色库蚊阳性对照的一致性为99%;与GenBank中淡色库蚊rDNA-ITS2基因的同源性为99%。结论通过对淡色库蚊、白纹伊蚊、嗜人按蚊核糖体DNA第二内转录间隔区(rDNA-ITS2)基因的序列分析,表明3种蚊媒的rDNA-ITS2基因具有可鉴别的种属特异性。利用同一体系的共享引物扩增,可以建立适用于3种蚊媒的现场鉴定方法。; 耿艺介高世同黄达娜庾蕾张仁利; 关键词：淡色库蚊白纹伊蚊嗜人按蚊 RDNA-ITS2

RNA干扰在吸血媒介研究中的应用: 2009年; 吸血媒介不仅危害动物健康,而且还能传播各种虫媒疾病,从而严重危害人类健康。因此,研究吸血媒介在公共卫生方面具有十分重要的意义,如研究如何控制吸血媒介以及其对病原体的传播具有极其重要的意义。本文概要介绍RNA干扰(RNAi)的基本原理,并对其在吸血媒介基因功能研究、保护性抗原筛选及鉴定、抑制病原体感染吸血媒介及其在吸血媒介中的繁殖等方面的研究进展进行综述。; 叶勇刚张仁利朱兴全; 关键词：RNA干扰基因功能

嗜人按蚊rDNA-ITS2基因的克隆鉴定及SNP分析被引量：1: 2007年; 目的克隆和分析嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)第2内转录间隔区(ITS2)序列,研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的种属特异性及不同个体rDNA-ITS2序列的单核苷酸多态性(Single Nuclear Polymorphism,SNP)。方法用DNA提取试剂盒从嗜人按蚊中提取DNA摸板,利用蚊虫5.8S和28S序列的保守性设计特异引物进行聚合酶链反应以扩增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,扩增产物经回收纯化后连接到TA载体,经amp+LB固体平板筛选的阳性克隆,经amp+LB液体培养基培养后进行PCR鉴定、EcoRI酶切鉴定和序列分析。结果经PCR反应扩增出全长556bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,纯化后重组克隆经PCR鉴定可重现556bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同。嗜人按蚊6个克隆的同一性为99.6%,其rDNA-ITS2基因单核苷酸存在颠换和插入,在556的范围内有一个A→T,一个G→T的颠换;一个T的插入。结论嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在种间高度保守,但不同个体间也存在一定的SNP多态性。; 耿艺介黄达娜高世同庾蕾黄继莲张仁利; 关键词：嗜人按蚊聚合酶链反应单核苷酸多态性

嗜人按蚊雌蚊消减cDNA文库的构建及分析被引量：2: 2008年; 目的构建嗜人按蚊雌雄蚊差异表达cDNA文库。为进一步筛选、克隆嗜人按蚊雌雄蚊差异新基因奠定基础。方法以嗜人按蚊为实验模型．分别将雌蚊和雄蚊作为T组和D组．采用抑制消减杂交方法和T／A克隆技术构建嗜人按蚊差异表达cDNA文库。扩增正向消减cDNA文库获得3000余个阳性克隆．随机挑取100个克隆进行PCR扩增，90％的克隆中均有200～1000bp的插入片段。测序显示．有与冈比亚按蚊未知功能基因同源的克隆，去除重复序列，得到72个EST序列．其中40与已知序列具有相似性．32个为新的EST序列。本项研究成功构建了嗜人按蚊雌蚊差异表达cDNA文库，获得了32个新的EST序列。从而为下一步筛选、克隆嗜人按蚊性别差异新基因打下了基础。; 赵以睿张仁利耿艺介高世同黄达娜朱兴全; 关键词：嗜人按蚊抑制差减杂交

嗜人按蚊雌蚊差异表达基因的鉴定及全长cDNA的克隆: 2009年; 目的鉴定和克隆嗜人按蚊雌蚊差异表达基因并对基因序列进行分析。方法以嗜人按蚊为试验模型,根据差异表达基因EST序列(GenBankTM接受号:EX916923)设计引物,采用实时定量PCR(real-time PCR)和RACE(rapid amplifica-tion of cDNAend)技术对雌蚊差异表达基因进行鉴定并扩增其cDNA序列。结果利用F=2-△△CT公式计算出雌蚊差异表达基因在雌蚊和雄蚊中的表达比值为267.49;差异表达基因全长mRNA序列为364bp,开放阅读框(ORF)编码的氨基酸序列经BLAST分析与致倦库纹(Culexquinque fasciatus)结构蛋白(tectin)及其他物种蛋白序列具有相似性。序列发送至NCBI获得接受号:FJ907236。结论该基因为雌蚊差异表达的基因,其全长mRNA序列的获得为进一步研究其生物学功能奠定了基础。; 叶勇刚赵以睿张仁利耿艺介黄达娜高世同林瑞庆朱兴全; 关键词：嗜人按蚊实时定量PCR RACE

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