江苏省自然科学基金(BK2009327)
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 相关作者：何孔旺吕立新倪艳秀周俊明茅爱华更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪链球菌2型在家兔体内的分布及致病性
- 2011年
- 用猪链球菌2型SS2-1株按109 CFU/只分别以静脉、肌肉、皮下、滴鼻、口服5种途径人工感染健康家兔,结果前4种感染途径均可引起发病并死亡,口服不发病,且以静脉感染发病最急。当分别静脉注射109,108,107,106,105 CFU/只SS2-1株,肌肉注射108,106 CFU/只SS2-1株,结果证实感染剂量与发病程度有正相关性,家兔临床症状和病理变化明显。用荧光定量PCR方法检测所有感染家兔组织的含菌量,结果提示发病程度与含菌量呈正相关,且各组织含菌量有差异。另外,人工感染家兔后在不同时间点取动物组织做菌体含量动态监测,结果提示体内含菌量随时间推移递增,发病高峰或死亡时达最高值。试验结果证明SS2-1株对家兔易感,致病性稳定,且细菌在动物体内增殖稳定并具有规律性。
- 胡东波何孔旺倪艳秀俞正玉吕立新周俊明茅爱华范红结
- 关键词：家兔猪链球菌2型
- 猪IL-1β与IL-18 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2011年
- IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述3个因子核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立了检测IL-1β、IL-18及β-actin SYBR GREEⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.990以上;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝;重复性好,组内变异系数均小于4%。
- 汪伟倪艳秀温立斌吕立新周俊明俞正玉茅爱华张雪寒李彬郭容利王小敏范红结何孔旺
- 关键词：促炎症细胞因子IL-1ΒIL-18
- 猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白部分片段的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2012年
- 为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14～28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。
- 周俊明何孔旺倪艳秀俞正玉茅爱华吕立新温立斌张雪寒郭容利李彬王小敏
- 关键词：猪链球菌2型MRP原核表达间接ELISA
- 猪链球菌2型对细胞粘附作用及粘附因子转录水平分析被引量：4
- 2013年
- 本研究中主要采用粘附计数和目前已发表的粘附因子,通过检测它们mRNA相对转录水平,研究了SS2粘附PK-15细胞、HEp-2细胞及PIEC的能力。结果显示,总体强毒株对细胞的粘附能力较强,无毒株对细胞没有粘附能力,但这不是绝对的,并初步在mRNA水平上阐明SS2粘附细胞能力差异的原因。这为后续研究SS2粘附机制及了解SS2感染后的致病机理奠定基础。
- 汪伟何孔旺倪艳秀吕立新周俊明张雪寒
- 关键词：猪链球菌2型粘附作用粘附因子荧光定量PCR
- 国内病猪中猪链球菌2型分离株溶血素基因的PCR检测及序列分析
- 2009年
- 以探明猪链球菌2型（SS2）国内病猪分离株的溶血素基因（sly）的分布情况及其序列为目的。通过聚合酶链反应（PCR）方法检测29株不同年代、不同地区SS2国内分离株的sly，并将其中的5株（SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507和ZY05719）sly进行克隆及序列分析。结果显示：29株菌都有sly，其中5株菌的sly的ORF的碱基数目都为1494bp、编码497个氨基酸，核苷酸序列的同源性为99．7％～100．0％，所推导的蛋白质序列的同源性为99．8％～100．0％，其中SS2—1、HA9801、HA0507、JR0507与国外参考株P1／7的序列完全一致。表明中国猪链球菌2型病猪分离株普遍具有sly，且基因序列极为保守。
- 倪艳秀何孔旺俞正玉温立斌吕立新张雪寒郭容利周俊明茅爱华陆承平
- 关键词：猪链球菌2型溶血素基因
- 正常屠宰猪致病性猪链球菌7型的鉴定和特性研究被引量：1
- 2011年
- 从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌,命名为HA100111。该细菌呈链球菌的特征形态,药敏试验表明该菌株对多种抗生素有耐药性。经PCR及序列分析,确定该分离菌株为猪链球菌7型,其毒力因子基因型为gdh+/m rp-/epf-/sly-/orf2+/fbps+。动物致病性试验表明,该菌对ICR小鼠和新西兰兔有较强的致病性,对ICR小鼠半数致死量为2.67×107CFU,但是对仔猪无明显致病作用。得出结论,在正常猪扁桃体中可携带致病性的猪链球菌7型。
- 茅爱华倪艳秀吕立新俞正玉周俊明胡东波温立斌张雪寒郭容利李彬王小敏何孔旺
- 猪链球菌2型HA0609的分离及致病性研究被引量：1
- 2013年
- 从江苏省某屠宰场猪的扁桃体中分离到1株细菌,通过培养特性、菌体形态、菌落形态、染色特性、生化试验以及荚膜多糖(cps)基因的PCR检测,确定为猪链球菌2型,命名为HA0609。本试验针对猪链球菌7种主要毒力因子——谷氨酸脱氢酶(gdh)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)、次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdh)及毒力相关序列orf2,进行PCR检测。与已知强毒株比较,该菌株2种主要毒力因子sly和epf均为阴性。动物试验显示HA0609对猪、兔和Balb/c鼠均无致病性。
- 吕立新何孔旺倪艳秀俞正玉茅爱华
- 关键词：猪链球菌2型扁桃体
