国家自然科学基金(31372484)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 猪PLE1基因启动子克隆及序列分析被引量：3
- 2014年
- 通过巢式PCR方法获得猪PLE1基因5′端上游启动子序列,通过T/A克隆法对PLE1基因的启动子进行克隆,并对PCR鉴定为阳性的克隆子进行测序,参考人、啮齿类的羧酸酯酶家族的启动子结构,并利用启动子在线分析软件对其进行生物信息学分析。结果成功克隆得到PLE1基因5′端上游1 153bp的调控片段,分析表明该调控区没有CpG岛,也不存在典型的TATA盒结构;有2个转录起始位点分别位于翻译起始密码子ATG上游-39bp和-37bp处,潜在的转录因子结合位点有C/EBP、Sp1、USF、CdxA、GATA-X、GATA-1、GATA-2、GATA-3、MZF1、AML-1a、SRY、Nkx-2、Lyf-1、deltaE等。另外还发现了7种基序分别为EGF_1、INTEGRIN_BETA、CTCK_1、ANAPHYLATOXIN_1、THIOLASE_3、TUBULIN、VWFC_1。研究结果可为进一步揭示PLE1基因转录调控机制提供理论参考。
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- 关键词：启动子转录因子
- 猪肝羧酸酯酶1基因的克隆和在原核细胞中的功能性表达
- 2015年
- 为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在Origami TM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到PLE1基因编码区全长1 686bp的片段,该片段编码562个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,PLE1融合蛋白质成功表达,在30℃的培养温度下,IPTG诱导6h后,PLE1重组蛋白质表达量最高,且大部分以可溶性形式存在。酶活性试验结果表明,PLE1融合蛋白质水解底物p-NPA的酶活力为1.24U。研究结果不仅为研究PLE1水解兽药特性提供高纯度的具有原有酶活性的重组蛋白质,也为PLE同工酶家族其他重要成员的活性功能研究提供理论依据和技术手段。
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- 关键词：活性检测
