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国家自然科学基金(30270571): 作品数：10 被引量：23H指数：3; 相关作者：林茂芳牟海波俞静岑洪黄河更多>>; 相关机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

转化生长因子β_1对树突细胞功能的影响被引量：4: 2004年; 目的　研究转化生长因子 β1(TGF β1)对树突细胞 (dendriticcells,DC)功能的影响。方法　在培养体系中应用不同的细胞因子培养未成熟DC (imDC ,GM CSF)和TGF β1处理的DC(TGFβ DC ,GM CSF +TGF β1) ,观察其对脂多糖 (LPS)刺激的反应。透射电镜观察细胞超微结构 ,流式细胞仪检测细胞表型 ,BrdUELISA法检测DC刺激异基因T细胞增殖的能力 ,ELISA法检测DC在LPS刺激后分泌IL 12 p70的水平 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测Toll like受体 4(TLR4 )表达。结果　与imDC相比 ,TGFβ DC在LPS刺激后仍能保持未成熟的细胞形态。TGFβ DC的CD80 ,CD86表达明显低于imDC[(4 .14± 0 .95 ) %和 (13.90± 7.2 2 ) % ;(8.6 0± 0 .75 ) %和 (2 0 .6 3± 5 .0 3) % ,P值均 <0 .0 5 ]。ImDC对LPS有更强的反应性 ,其中I Ab、CD80升高的幅度明显高于TGFβ DC(P值分别 <0 .0 1及 <0 .0 5 )。TGFβ DC在 96h的混合淋巴细胞反应中 ,DC/T细胞为 1∶4 ,1∶1时 ,TGFβ DC的异基因刺激能力较imDC弱 (P值均 <0 .0 5 )。LPS刺激TGFβ DC 2 4h后分泌IL 12p70的能力显著低于imDC(P <0 .0 1) ,TGFβ DC较imDC弱表达TLR4 (P <0 .0 5 )。结论　TGFβ能抑制DC共刺激分子的表达 ,且能抵抗LPS的促成熟作用 ,并可能与其TLR4的表达下降?; 林茂芳牟海波岑洪; 关键词：转化生长因子Β1 树突细胞细胞功能 TGF-Β1 DC

巨细胞病毒抑制树突状细胞抗原递呈功能被引量：2: 2007年; 目的:探讨巨细胞病毒(CMV)对单核细胞来源的树突状细胞(DC)的感染效率及对受染细胞的功能影响。方法:以50半数细胞培养感染量(TCID50)滴度的CMV与未成熟及成熟DC(imDC,mDC)共培养,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内CMV即刻早期抗原(IEA)mRNA水平,间接免疫荧光技术检测受染细胞内早期抗原(EA)阳性率,流式细胞仪检测细胞胞内病毒晚期抗原pp65表达,BrdUELISA法检测受染DCs(cmv-imDC,cmv-mDC)刺激异基因T细胞增殖能力。结果:感染12h,cmv-mDC内IEA mRNA水平低于cmv-imDC,相对表达量分别为0.102±0.020和0.862±0.124(P<0.05)。24h,imDC组EA阳性率高于mDC组,分别为(62.32±14.20)%和(10.78±3.04)%(P<0.01)。72h,cmv-DC胞内低表达pp65抗原,imDC和mDC中阳性率分别为4.86%和0.82%。与未处理mDC相比,cmv-imDC经成熟诱导因子LPS作用后,其刺激异基因T细胞增殖能力较弱(均P<0.05);而cmv-mDC,仅当DC/T细胞为1:1时,刺激能力下降(P<0.05)。结论:CMV可有效感染imDC,并在细胞内复制活化;cmv-DC的抗原递呈能力下降。; 赵广圣林茂芳; 关键词：巨细胞病毒感染树突细胞抗原呈递

酶联免疫斑点法研究小鼠急性移植物抗宿主病模型中产生干扰素γ细胞的水平被引量：1: 2006年; 目的:探讨异基因小鼠混合淋巴细胞反应(M LR)和急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型中,供者针对受者细胞反应后产生干扰素-γ细胞(IFN-γPC)的水平。方法:在近交系MHC不合的异基因小鼠脾细胞M LR和aGVHD模型中,用酶联免疫斑点法(EL ISPOT)对供者针对受者细胞反应后IFN-γPC的水平及其影响因素进行了研究。结果:在异基因小鼠脾细胞M LR后,用EL ISPOT检测到IFN-γPC显著升高,具有针对受者细胞的特异性。在异基因小鼠aGVHD模型中,重度aGVHD小鼠脾细胞与未移植的异基因受鼠脾细胞在M LR后,IFN-γPC较中度aGVHD明显升高,无aGVHD药物预防组较预防组IFN-γPC明显升高,并具有针对受者细胞的特异性,与aGVHD的临床评分相一致。结论:用EL ISPOT可以快速而敏感地检测异基因小鼠脾细胞M LR中的同种异体反应,并和aGVHD的程度以及病程具有相关性。; 孟筱坚林茂芳牟海波傅剑云章荣华; 关键词：异基因混合淋巴细胞反应急性移植物抗宿主病干扰素Γ

转化生长因子β1抑制树突状细胞的成熟及下调TLR4的表达被引量：7: 2005年; 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对小鼠来源树突状细胞(DC)功能的影响。方法:在培养体系中同时应用GM-CSF和TGF-β1培养的TGFβ-DC,用脂多糖(LPS)观察其对外源刺激的反应,流式细胞仪(FCM)检测细胞表型,应用BrdUELISA法通过96h混合淋巴细胞反应(MLR)检测其同种异基因刺激能力,ELISA法测IL-12p70的分泌水平,分别用半定量RT-PCR法和FCM检测Toll-like受体4(TLR4)表达。结果:TGFβ-DC与常规培养的未成熟DC(imDC)相比,CD80、CD86、I-Ab、CD40表达更低。LPS对TGFβ-DC的促成熟作用反应不明显,其表面共刺激分子升高的幅度不大,异基因的刺激能力提高不显著,且IL-12p70的分泌下降。RT-PCR与FCM都显示TGFβ-DC较imDC弱表达TLR4。结论:TGFβ1能抑制DC共刺激分子的表达,TGFβ-DC能抵抗LPS的促成熟作用,并可能与其TLR4表达下降有关。; 牟海波林茂芳岑洪黄河; 关键词：树突细胞转化生长因子Β

整合素相关蛋白与免疫被引量：1: 2005年; CD47分子又称整合素相关蛋白,是一种多次跨膜的糖蛋白,在机体的各种细胞及组织上均有表达。CD47分子通过与其整合素配体、信号调节蛋白α(SIRP-α)、凝血酶敏感蛋白(TSP-1)的相互作用,对机体发挥着重要的调控作用。其参与调控细胞的粘附与增殖,激活血小板,抑制红细胞的清除等生理过程,并通过诱导淋巴细胞凋亡,协同刺激T细胞活化,抑制T细胞向Th1型细胞分化,以及影响树突状细胞(DC)的分化成熟及细胞因子的分泌,对免疫系统发挥着重要的调节作用,对诱导免疫耐受、防治移植物抗宿主病(GVHD)及自身免疫性疾病均有重要的意义。; 俞静林茂芳; 关键词：凝血酶敏感蛋白

抗CD47单克隆抗体(B6H12)对人树突状细胞成熟及其功能的影响(英文): 2005年; 为阐明可溶性的抗CD47单克隆抗体(B6H12)对树突状细胞(DC)的免疫调控作用及分子机理.联合应用 rhGM-CSF、IL-4、细菌脂多糖(LPS)在体外诱导扩增人外周血单核细胞来源的DC,并在培养体系中添加抗CD47单克隆抗体(B6H12);采用透射电镜观察DC形态,流式细胞术检测DC膜表面分子的表达;ELISA法检测DC释放的 IL-12 P70水平;BrdU-ELISA法检测DC刺激同种异型淋巴细胞增殖,凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)检测NF-κB 结合活性变化。结果发现:①经抗CD47单克隆抗体(B6H12)处理的DC,膜表面标记(CD80、CD86、CD1a、CD83、 DR)的表达显著地低于未加B6H12单克隆抗体DC组(P<0.05);其释放IL-12 P70蛋白质的能力及刺激同种异型淋巴细胞增殖的能力也显著低于对照组(P<0.01)。②与未加B6H12单克隆抗体DC组相比,B6 H12单克隆抗体处理DC组的NF-κB活性显著降低(P<0.05),并且这种抑制作用随单克隆抗体浓度增大而增强。结论:可溶性的抗CD47单克隆抗体通过抑制NF-κB的结合活性,影响着DC向成熟发育及功能。; 俞静林茂芳; 关键词：树突状细胞免疫耐受

TGF-β1 treated murine dendritic cells are maturation resistant and down-regulate Toll-like receptor 4 expression被引量：3: 2004年; Objective: To explore the effects of transforming growth factor β1(TGF-β1) on dendritic cells (DC). Methods: Murine bone marrow cells were cultured with GM-CSF and TGF-β1 to develop TGF-β1-treated DC (TGFβ-DC). Then they were stimulated by lipopolysaccharide (LPS). Their phenotypes were assessed by flow cytometry (FCM). The allogeneicstimulating capacity of DC was measured by mixed lymphocyte reaction (MLR) using BrdU ELISA method and IL-12p70 protein was detected by ELISA. The expression of Toll-like receptor 4 (TLR4) was analyzed by semi quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and FCM. Results: Compared to immature DC (imDC) cultured by GM-CSF alone, the TGFβ-DC express lower CD80, CD86, I-A^b and CD40. The TGFβ-DC were resistant to maturation with LPS. Maturation resistance was evident from a failure to up-regulate co-stimulatory molecules (CMs), to stimulate larger T cells proliferation and to enhance secretion of IL-12p70. We also found that TGF-β1 could down-regulate TLR4 expression on TGFβ-DC. Conclusion: TGFβ-DC are resistant to maturation stimulus (LPS) and might have some correlation with the down-modulation of TLR4 expression.; 牟海波林茂芳岑洪俞静孟筱坚; 关键词：TGF-Β1 TGFΒ TOLL-LIKE

巨细胞病毒感染树突细胞及其对抗原呈递的影响: 2006年; 已有研究报道,CMV感染单核细胞后,可抑制其向树突细胞（DC）分化,而树突细胞是重要的专职抗原呈递细胞,在免疫应答中起关键的引导和调节作用,其成熟程度是引发T细胞依赖性免疫应答所必需.我们旨在探讨CMV能否感染不同成熟阶段树突细胞及其对该细胞抗原呈递功能的影响.; 赵广圣林茂芳; 关键词：巨细胞病毒感染抗原呈递细胞树突细胞 CMV感染 T细胞依赖性

基于细胞因子对介导同种异体反应的T淋巴细胞的测定和富集及扩增被引量：1: 2006年; 目的：对同种异体外周血单个核细胞（PBMNCs）刺激后分泌细胞因子的T淋巴细胞进行测定、富集和扩增，为研究介导同种异体反应的T淋巴细胞提供新的途径。方法：利用细胞因子分泌检测方法（CKSA），从单细胞水平定量测定人混合淋巴细胞反应中分泌干扰素-γ（IFN-γ）的T淋巴细胞；并对其进行磁性富集、扩增，再用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测其对原抗原的特异性。结杲：同种异体PBMNCs刺激后检测到分泌IFN-γ的T淋巴细胞水平较对照组明显升高[（1．12±0．13）%vs（0．23±0．07）%，P〈0．05]，进一步富集达（67．3±10．5）%，相对倍数为（93．8±22．1）倍。经过富集的细胞能够通过OKT3、抗CD28单抗和IL-2组合，在21～28d扩增〉600倍，扩增后的细胞保留与原相关异基因刺激细胞特异性反应，并具分泌IFN-γ的能力。结论：利用CKSA从单细胞水平定量测定到显著升高的由同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN-γ的T淋巴细胞。这些细胞可以被有效地富集和扩增，并保留针对原抗原的特异反应性。; 孟筱坚林茂芳蔡真; 关键词：T-淋巴细胞酶联免疫吸附测定

抗CD47单抗对人树突状细胞的免疫调控作用及其机制探讨被引量：4: 2004年; 目的研究可溶性的抗CD47单抗(B6H12)对树突状细胞(DC)的免疫调控作用及分子机理。方法分离人外周血单核细胞,联合应用rhGM-CSF、IL-4、细菌脂多糖(LPS)在体外诱导扩增DC,并在培养体系中添加抗CD47单抗(B6H12)。采用透射电镜观察DC形态,流式细胞仪检测DC膜表面分子,ELISA定量检测DC释放IL-12P70水平,Brdu-ELISA法检测DC刺激同种异型淋巴细胞增殖,凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)检测NF-κB活性。结果(1)经抗CD47单抗(B6H12)处理的DC,膜表面CD80、CD86、CD1a、CD83、DR表达显著降低(P<005);其释放IL-12P70的水平及刺激同种异型淋巴细胞增殖的能力也显著低于对照组(P<001)。(2)B6H12单抗处理DC组其NF-κB活性显著降低(P<005),且该效应呈剂量依赖性。结论抗CD47单抗可通过抑制NF-κB活性而影响DC的发育、成熟及功能。; 俞静林茂芳牟海波黄河蔡真; 关键词：树突细胞免疫耐受

国家自然科学基金(30270571)

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