重庆市教委科研基金([2005]12)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：宋方洲马永平易发平潘巍巍赖国旗更多>>
- 相关机构：重庆医科大学教育部重庆市生物化学与分子药理学重点实验室更多>>
- 发文基金：教育部“春晖计划”国家自然科学基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳头瘤病毒E6E7基因重组腺病毒的构建及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的:利用AdEasy系统构建人乳头瘤-16(HPV-16)E6E7基因重组腺病毒,并通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.方法:将质粒pET-32a(+)-E6E7扩增、酶切获得E6E7片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-E6E7,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-E6E7,经人胚肾293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-E6E7;用包装后的病毒上清再次感染293细胞,提取细胞中的蛋白,通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd-E6E7;经人胚肾293细胞包装,3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得6.9×1010pfu/L滴度的重组病毒;用该滴度的Ad-E6E7重新感染人胚肾293细胞3d后,提取细胞蛋白,WesternBlot检测,E6E7有明显表达.结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6E7的重组腺病毒AdE6E7.
- 潘巍巍成海恩赖国旗易发平马永平宋方洲
- 关键词：人类乳头状瘤病毒腺病毒科
- 构建人乳头瘤病毒关键基因的原核重组载体被引量：1
- 2006年
- 目的构建HPV16E6/E7关键基因的原核载体pET-32(+)-E6/E7并将其转到大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,最后获得E6/E7基因表达产物。方法用PCR方法从含有HPV16全基因序列的质粒中扩增E6/E7基因,将E6/E7基因连接到pET-32a(+)质粒上,并转到大肠杆菌BL21(DE3)中。最后检测E6/E7基因。结果获得重组后的载体pET-32(+)-E6/E7。结论成功构建表达了含有E6E7的原核重组载体,并在大肠杆菌中表达。
- 潘巍巍赖国旗宋方洲易发平马永平左国伟
- 关键词：人乳头瘤病毒HPV16
- HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡被引量：5
- 2007年
- 目的:观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染,联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的效应。方法:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染人宫颈癌Ca Ski细胞,随后利用RT-PCR技术检测细胞中HPV-16 E6癌基因的mRNA水平变化;Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化;流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果:经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPV E6癌基因的mRNA水平均下降,其中联合转染组显著下降(P<0.05);抑癌蛋白p53水平均增高,其中联合转染组显著增高,细胞凋亡率均升高,其中联合转染组显著升高(P<0.05)。结论:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌Ca Ski细胞后,均能抑制Ca Ski细胞中HPV-16 E6癌基因的表达,使抑癌蛋白p53恢复活性,诱导宫颈癌Ca Ski细胞凋亡;两者联合则具有协同效应,能显著提高肿瘤细胞凋亡率。
- 石华杨俊霞袁成福易发平魏丽丽刘革力马永平宋方洲
- 关键词：凋亡E6SIRNACA
