广东省科技计划工业攻关项目(99M01204G)
- 作品数:12 被引量:43H指数:5
- 相关作者:张洹何冬梅雷小勇刘革修廖继东更多>>
- 相关机构:暨南大学南华大学更多>>
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- bcl-2基因反义寡核苷酸的设计与白血病细胞对Ara-C敏感性研究被引量:2
- 2003年
- 寻找在bcl 2mRNA上除了起始区以外的反义寡核苷酸作用的敏感位点和观察这些核苷酸对白血病细胞的阿糖胞苷敏感性的影响。用RNAstructure软件模拟bcl 2mRNA的二级结构设计合成两端硫代修饰反义寡核苷酸 ,用MTT法测定抑制HL 6 0和K5 6 2细胞的阿糖胞苷半数抑制浓度 (IC50 )值 ;用流式细胞术检测HL 6 0和K5 6 2细胞凋亡率和bcl 2蛋白表达水平。结果发现 ,10 μmol Lbcl 2基因的反义寡核苷酸同Ara C结合使用 ,能明显地抑制HL 6 0和K5 6 2细胞bcl 2基因蛋白的表达 ,促进细胞凋亡 ,减低Ara C的IC50 值 ;同时发现针对蛋白编码区的反义寡核苷酸有更强的作用。结论 :除了bcl 2mRNA的起始区外 ,在bcl 2mRNA的其他部位存在有设计反义寡核苷酸更有效的位点 。
- 雷小勇张洹
- 关键词:BCL-2反义寡核苷酸阿糖胞苷
- bcl-2反义寡核苷酸增强NCI-H460细胞对紫杉特尔和放射线的敏感性被引量:4
- 2005年
- 目的研究bcl2反义寡核苷酸作用于非小细胞肺癌细胞株NCI H460后,细胞对紫杉特尔、放射线敏感性的变化。方法紫杉特尔与bcl2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸联合作用NCI H460细胞后,MTT法测紫杉特尔半数抑制率(IC50);NCI H460经bcl2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸作用后,再用放射线照射,MTT法测定细胞生长抑制率;免疫荧光标记观测细胞Bcl2蛋白水平。结果靶向bcl2mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸与紫杉特尔联合作用于NCI H460细胞后紫杉特尔的IC50值为(0.101±0.009)μmol/L,与不加寡核苷酸组紫杉特尔的IC50值[(0.183±0.018)μmol/L]或无义寡核苷酸联用紫杉特尔的IC50值[(0.179±0.016)μmol/L]相比,统计学上具有显著性差异(P<0.05)。bcl2反义寡核苷酸与放射线联合作用NCI H460细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,分别与单用放射线及bcl2无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P<0.05)。bcl2反义寡核苷酸分别与紫杉特尔、放射线作用于NCI H460细胞后显著抑制Bcl2蛋白表达,分别与单用紫杉特尔、放射线或无义寡核苷酸联用紫杉特尔、放射线相比,统计学上具有显著性差异(P<0.05)。结论靶向bcl2mRNA的反义寡核苷酸能增强NCI H460细胞对紫杉特尔、放射线的敏感性。
- 何冬梅张洹
- 关键词:反义寡核苷酸NCI-H460细胞紫杉特尔放射线敏感性
- Bcl-2反义核酸的设计及对K562细胞凋亡的研究被引量:6
- 2002年
- 目的 :探讨bcl 2不同靶点的反义寡核苷酸 (ASODN)对白血病细胞株K5 6 2细胞凋亡的影响。方法 :用RNA二级结构预测程序预测bcl 2mRNA的二级结构 ;免疫荧光标记观察细胞bcl 2蛋白水平 ;细胞记数观察细胞的生存情况 ;用流式细胞仪观察细胞凋亡。结果 :在 5个初选的反义序列中 ,靶向bcl 2mRNA蛋白编码区和翻译起始区的ASODN能明显地下调bcl 2蛋白的表达 ,并且两个不同靶点的ASODN能有效地抑制K5 6 2细胞的生长活性、促进细胞凋亡 ;靶向bcl 2mRNA蛋白编码区的ASODN降低细胞bcl 2蛋白、促进细胞凋亡的作用较靶向翻译起始区的ASODN强。随机的无义寡核苷酸对K5 6 2细胞的生长活性、bcl 2蛋白水平及细胞凋亡率均无影响。结论 :分别在bcl 2mRNA翻译起始区和蛋白编码区发现了两个有效的反义作用靶点 ,针对这两个靶点的ASODN能特异性促进K5 6
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词:BCL-2反义寡核苷酸K562细胞细胞凋亡
- bcl-2反义寡核苷酸增强足叶乙苷诱导原代白血病细胞凋亡的研究被引量:2
- 2002年
- 目的 :研究 bcl- 2的反义寡核苷酸对足叶乙苷 (VP1 6 )诱导原代培养的急性白血病(AL)细胞凋亡的影响。方法 :用细胞计数法观察细胞的生存情况 ;用免疫荧光标记法通过流式细胞仪观测细胞 bcl- 2蛋白水平 ;用形态学观察及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 :靶向 bcl- 2 m RNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与 VP1 6 联合作用 AL 细胞 4 8h,细胞的生存受到明显的抑制 ,分别同无关寡核苷酸 (NS- ODN)联合 VP1 6 组、单用 VP1 6 组进行比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与 VP1 6 联用 ,均能明显下调 AL 细胞 bcl- 2蛋白的表达 ,并且联合作用 AL 细胞 4 8h的凋亡细胞百分率分别与 NS- ODN联合 VP1 6 组、单用 VP1 6 组进行比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :针对 bcl- 2 m RNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强 VP1 6 诱导急性白血病细胞的凋亡。
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词:BCL-2反义寡核苷酸足叶乙苷白血病细胞凋亡
- 端粒酶基因反义核酸下调HL-60细胞端粒酶活性的研究被引量:8
- 2002年
- 背景与目的:人类端粒酶催化亚单位(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因是端粒酶活化唯一的限制性组分。在细胞永生化过程中,hTERT表达的调控是一个关键性的靶目标。端粒酶RNA的反义核酸可以抑制端粒酶的活性及肿瘤细胞的生长。本研究观察hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响。方法:采用端粒重复序列扩增法检测白血病细胞的端粒酶活性;采用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。结果:hTERT基因ASODN作用于HL-60细胞后,hTERTmRNA表达水平及蛋白表达水平均明显降低,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比有显著性差异(P<0.05)。同时hTERT基因ASODN作用于HL-60细胞48h,其端粒酶活性明显降低;作用72h,端粒酶活性明显受到抑制。结论:通过hTERT基因反义寡核苷酸特异性地抑制hTERT基因的表达可下调HL-60细胞的端粒酶活性。
- 何冬梅张洹
- 关键词:端粒酶HL-60细胞HTERT
- bcl-2反义核酸增强柔红霉素诱导原代白血病细胞凋亡的研究
- 2003年
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词:柔红霉素原代白血病细胞凋亡
- Bcl-2反义寡核苷酸增强阿糖胞苷诱导原代白血病细胞凋亡的研究被引量:11
- 2002年
- 背景与目的:有研究证实,针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区的2个有效反义作用靶点的反义寡核苷酸能增强HL-60和K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素、足叶乙甙的敏感性。本研究观察这两个新靶点的反义寡核苷酸对Ara-C诱导原代培养的急性白血病(AL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞凋亡的影响。方法:用细胞记数法观察细胞的生存情况;免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色法观察并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:靶向bcl-2mRNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与Ara-C联合作用AL、CLL细胞48h,细胞的活性受到明显的抑制,分别同无关寡核苷酸(NS-ODN)联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与Ara-C联用均能明显下调AL、CLL细胞Bcl-2蛋白的表达,并且联合作用AL、CLL细胞48h的凋亡细胞百分率分别与NS-ODN联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。与靶向bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸比较,靶向蛋白编码区的反义寡核苷酸提高AL细胞对Ara-C的敏感性作用要强些(P<0.05)。结论:针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强Ara-C诱导AL、CLL细胞的凋亡。
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词:反义寡核苷酸阿糖胞苷白血病细胞
- 胎肝Sca-1^+细胞移植造血重建被引量:3
- 2002年
- 目的:观察胚胎肝Sca-1+细胞能否重建造血。方法:免疫磁珠法分离孕14 5dC57BL/6J小鼠的雄性胚胎肝的Sac-1+细胞,经尾静脉注射(细胞数为2 0×103/只)移植到致死剂量(10 0Gy)放射线照射的8~10周C57BL/6J雌性小鼠;sry基因PCR方法检测受体小鼠外周血中供体来源的血细胞。结果:移植胚胎肝Sca-1+细胞的实验组小鼠外周血各种血细胞数在5d后开始下降,在10d后开始上升,20d恢复至正常,均存活6个月以上;而未移植Sca-1+造血干细胞的对照组小鼠20d内全部死亡。多聚酶链式反应(PCR)显示实验组小鼠外周血细胞sry基因检测阳性,未移植对照组小鼠外周血细胞sry基因检测均为阴性;随着移植时间的延长,移植小鼠外周血细胞sry基因的PCR扩增物量增加,说明雄性胚胎供体来源的细胞在增加,反映造血重建情况。结论:胚胎肝Sca-1+细胞能重建致死剂量放射线照射的小鼠造血功能。
- 刘革修张洹
- 关键词:胚胎肝SCA-1^+细胞造血干细胞造血重建小鼠
- 小鼠胎肝Sca-1^+细胞分化为心肌细胞的研究被引量:1
- 2005年
- 目的:探讨小鼠胎肝组织中干细胞抗原1阳性的细胞(Sca 1+细胞)向心肌细胞分化的潜能。方法:取妊娠14.5 d的小鼠胎肝,制作细胞悬液,用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca 1+细胞,PCR鉴别Y染色体性别决定区域(Sry)基因序列;将2×103 个雄性小鼠Sca 1+细胞输注给经致死剂量60Co(10 Gy)全身照射的雌性小鼠体内,于移植后2个月,处死受体小鼠,取心肌组织固定、制片,免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠心肌组织内供体小鼠胎肝Sca 1+细胞向心肌细胞分化的情况。结果:在受体小鼠心肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,呈现心肌组织的部分特征,表型为Desmin+/Flt 1-/CD45-/F-4/80。结论:小鼠胎肝Sca 1+细胞(其中绝大部分是造血干细胞)具有向心肌组织细胞分化的潜能。
- 姜铧张洹廖继东
- 关键词:胎肝SCA-1^+细胞细胞分化心肌组织
- Bcl-2反义核酸增强HL-60、K562细胞对柔红霉素敏感性的研究被引量:6
- 2003年
- 目的 :研究bcl- 2反义寡核苷酸作用后 ,白血病细胞株HL60、K562细胞对柔红霉素 (DNR)敏感性的影响。方法 :MTT法测HL60、K562细胞中DNR的半数抑制率 (IC50 ) ;免疫荧光标记观测细胞Bcl - 2蛋白水平 ;用Hoechest332 58和碘化丙锭双染色法及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 :靶向bcl- 2mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸(AS-ODN1 )和靶向翻译起始区的反义寡核苷酸 (AS -ODN2 )分别与DNR联合作用于HL60细胞后DNR的IC50值分别为 0 .1 2 4± 0 0 1 1、0 1 4 9± 0 0 1 2 ,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值 (0 1 73± 0 0 2 1 )或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值 (0 1 80± 0 0 2 3)相比有显著差异 ,P <0 0 5。AS -ODN1和AS -ODN2分别与DNR联合作用于K562细胞后DNR的IC50值分别为 0 0 78± 0 0 0 7、0 0 79± 0 0 0 8,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值 (0 1 0 6± 0 0 1 1 )或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值 (0 1 0 7± 0 0 1 2 )相比有显著差异 ,P <0 0 5。AS -ODN1和AS -ODN2分别与DNR同时作用于HL60或K562细胞后抑制Bcl- 2蛋白表达及诱导细胞凋亡率分别与单用DNR或无义寡核苷酸联用DNR相比有显著差异 ,P <0 0 5。与AS -ODN2比较 ,AS -ODN1提高HL60细胞对DNR的敏感性作用要强些 (P <0 0 5)。结论 :靶?
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词:反义寡核苷酸类HL-60细胞K562细胞柔红霉素