天津市自然科学基金(11JCZDJC18700)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 转录调节因子p8分泌表达载体的构建及在Fx293细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:构建可以产生分泌型转录调节因子p8重组蛋白的载体,期望进一步研究p8的功能。方法:利用定点诱变的方法在pDisplay表达载体中去除HA和Myc标记序列,保留小鼠Igκ信号肽和PDGFR跨膜结构域。在小鼠Igκ信号肽后是外源p8、凝血因子Xa识别位点和Flag序列,与PDGFR跨膜结构域形成融合基因。PCR扩增得到完整表达片段后用于慢病毒载体上的克隆,之后在包装细胞Fx293中产生重组慢病毒用于后续实验。结果:经测序证实所构建的质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒构建正确,体外转染Fx293细胞后产生重组蛋白。结论:成功构建体外可以产生p8的慢病毒载体,为体外产生重组分泌的p8多肽和体外鉴定与p8结合的蛋白分子实验奠定基础。
- 薛珊珊王晓洋李丁牛卿马振毅
- 关键词：转录调节因子分泌蛋白
- 在A549细胞中靶向p66^(Shc)shRNA的沉默效应被引量：3
- 2012年
- 目的:在人非小细胞肺癌细胞A549细胞中探讨shRNA靶向慢病毒对信号衔接蛋白p66Shc的沉默效应,以更好地研究p66Shc的功能。方法:半定量RT-PCR和Western blot检测p66Shc下调后的变化情况,BrdU标记实验检测细胞的增殖变化情况。结果:在A549细胞中,运用p66Shc-shRNA干扰可以实现p66Shc在mRNA和蛋白水平的下调作用,同时发现A549细胞的增殖显著降低。结论:经过慢病毒载体介导的p66Shc-shRNA在人非小细胞肺癌A549中可获得高效转染效果,并能产生特异性的基因沉默效应,而且对细胞的增殖有显著的抑制作用,为进一步研究p66Shc功能提供了实验手段。
- 陈娜王晓洋杜玮孙亚楠李西川马振毅刘喆
- 关键词：P66SHCSHRNA基因沉默
