国家自然科学基金(30270557)
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 相关作者：孟宪敏刘冬青时娜曹慧青柳明洙更多>>
- 相关机构：中国医学科学院阜外心血管医院中国医学科学院中国协和医科大学延边大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市重大科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 心肌特异表达基因p93的原核表达及鸡卵黄抗体的制备被引量：5
- 2005年
- 目的在大肠杆菌中高效表达心肌特异表达基因p93,以此作为抗原免疫产蛋母鸡,制备抗p93蛋白鸡卵黄抗体(IgY)。方法将p93基因分别插入原核表达载体pGEX-5X-1、pBV220、pET28a(+)中,选取表达量最高的载体进行表达纯化,其产物免疫产蛋母鸡。结果插入pET28a(+)中N端带有His标签的p93表达水平最高,且以包涵体形式存在,从含有pET28a-p93质粒的1L培养的菌液中可获得3mg纯化的p93蛋白。免疫产蛋母鸡,末次免疫后其卵黄抗体最高滴度达到1∶64000,Westernblot结果显示该抗体具有高度特异性。结论此抗体的制备为新基因p93的检测提供了良好的工具。
- 尤昕时娜赵秀文柳明洙刘冬青曹慧青孟宪敏
- 关键词：大肠杆菌蛋黄
- Nelin与F-actin及Filamin相互作用的鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的在用酵母双杂交方法将Nelin与人心脏cDNA文库进行杂交筛选,得到3个阳性克隆的基础上,进一步探讨新基因Nelin及其心肌表达产物Nelin蛋白的功能,并寻找能够与其发生相互作用的蛋白质。方法采用基因转染和表达技术,在真核细胞内外分别进行了Nelin蛋白与肌动蛋白(F-actin)结合的共沉降及免疫荧光共定位实验。并通过免疫共沉淀实验进一步验证所得的实验结果。结果证实了在细胞内外Nelin蛋白均能同F-actin相结合;还能与Filamin的C-末端免疫球蛋白样结构发生相互作用。结论Nelin为一个新的兼有actin及Filamin结合能力的蛋白。在心肌细胞内,Nelin很可能作为一个膜-细胞骨架连接蛋白,参与了细胞黏着斑形成的过程。
- 王震刘冬青王茵屈伸孟宪敏
- 关键词：肌动蛋白细丝蛋白免疫共沉淀
- 心肌特异表达基因p93的激酶及丝氨酸结构域在大肠杆菌中的高效表达被引量：3
- 2004年
- 目的 在大肠杆菌中高水平表达并分离纯化心脏特异表达基因p93的激酶与丝氨酸结构域片段。方法 利用DNA重组技术 ,构建C末端带有 6×His标签的p93激酶与丝氨酸结构域(p93 C)片段的原核表达载体pET2 8a p93 C。对诱导表达条件和包涵体洗涤条件优化后 ,用Ni2 +金属螯合吸附层析柱纯化。结果 成功构建了pET2 8a p93 C原核表达载体 ,诱导后摇床转速在 35 0r/min下表达量最高 ,包涵体洗涤在超声条件下较好 ,分离纯化后从 10 0ml菌液中可获得 2 5mg蛋白。结论建立了高效稳定的p93 C原核表达体系以及较好的包涵体洗涤方法。
- 尤昕时娜柳明洙曹慧青刘冬青孟宪敏
- 关键词：原核表达
