基础研究重大项目前期研究专项(2004ccc02900)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：吕典秋李勇王绍鹏邱彩玲吕文河更多>>
- 相关机构：黑龙江省农业科学院东北农业大学更多>>
- 发文基金：基础研究重大项目前期研究专项黑龙江省青年科学基金黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学交通运输工程机械工程更多>>
- 不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响被引量：1
- 2011年
- 灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍。利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行。
- 吕典秋刘尚武邱彩玲李勇宿飞飞王绍鹏吕文河
- 关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒探针核酸斑点杂交
- 马铃薯类病毒cDNA双体探针的研制及其在检测上的应用被引量：1
- 2009年
- 在马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid,PSTVd）基因组中BamHⅠ位点处（87~92nt）,设计两对含有BamHⅠ重叠区（overlop）的引物。将PCR扩增获得的全长PSTVd分别插入到pGM-T载体中。通过BamHⅠ位点,将两个PSTVd单体连接,构建了PSTVd双体载体。以此载体为模板,通过PCR标记技术,制备了高灵敏高专化的PSTVd双体cDNA地高辛标记探针。以CDP-Star为反应底物进行化学发光反应结果判读,建立了PSTVd的高效杂交检测体系。该体系可以对马铃薯薯块、叶片、芽等不同组织样品进行检测,检测灵敏度达到0.05pg。通过对67份田间采集的样品和实验室保存的资源材料进行检测,比较了cDNA双体探针核酸斑点杂交技术（nucleic acid spot hybridization,NASH）、反转录聚合酶链式反应（reverse-transcriptional polymerase chain reaction,RT-PCR）和往返-聚丙烯酰胺凝胶电泳（return-polyacrylamide gel electrophoresis,R-PAGE）检测技术的阳性样品检出率,结果显示,NASH技术阳性样品检出率为67.7%,与RT-PCR相一致,高于R-PAGE技术的阳性检测率（53.7%）。
- 吕典秋邱彩玲王绍鹏李勇高云飞
- 关键词：马铃薯马铃薯纺锤块茎类病毒探针双体核酸斑点杂交
- 利用cDNA双体探针检测马铃薯纺锤块茎类病毒
- 2009年
- 吕典秋刘尚武宿飞飞吕文河
- 关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒CDNA双体免疫学方法自我复制植物体内
