广东省医学科学技术研究基金(A2008619)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：房师松张仁利吕星吴春利程小雯更多>>
- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心广州军区广州总医院暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金深圳市科技计划项目更多>>
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- 聚合酶亚基间相互作用的抗流感病毒药物筛选体系的建立被引量：2
- 2011年
- 目的构建基于聚合酶亚基间相互作用的双靶点特异性抗流感病毒药物筛选酵母双杂交体系。方法将流感病毒A/PR8/34株PB2、PA基因克隆至载体pGADT7,PB1基因克隆至载体pGBKT7,将构建的酵母双杂交重组质粒PB2-pGADT7、PB1-pGBKT7和PA-pGADT7、PB1-pGBKT7分别共转化酵母AH109,利用SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal培养基筛选阳性菌落。结果 PB2-PB1共转化效率为1.4×104cfu/μg,PA-PB1共转化效率为1.6×104cfu/μg;双靶点特异性的酵母双杂交系统在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal上均有兰色菌落生长;PB2、PB1、PA基因PCR结果均为阳性。结论初步构建了流感病毒聚合酶亚基间相互作用的酵母双杂交系统,可用于抗流感病毒靶点特异性的药物高通量筛选。
- 房师松何建凡程小雯刘涛吕星吴春利王昕张仁利赵树进
- 关键词：酵母双杂交蛋白质相互作用药物筛选
- 基于RNA聚合酶靶点的抗流感病毒药物筛选系统的鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的鉴定基于聚合酶亚基间相互作用的靶点特异性抗流感病毒药物筛选酵母双杂交体系。方法挑取筛选平板SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal阳性单菌落(共转化质粒PB1-pGBKT7与PA-pGADT7的AH109酵母细胞)接种培养,PCR验证重组质粒共转是否成功;glass-beads法提取酵母总蛋白,Western-blot验证融合蛋白在酵母细胞中是否表达;将PB1-pGBKT7质粒PB1基因克隆至载体pAcGFP1-C,PA-pGADT7质粒PA基因克隆至载体pProLabel-C,将构建的重组质粒PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel共转染人胚肾GP2-293细胞,Co-IP验证在哺乳动物细胞中流感病毒聚合酶亚基PB1、PA具有相互作用。结果 PB1、PA基因PCR结果均为阳性;PB1-Myc融合蛋白Western-blot结果为阴性,PA-HA融合蛋白Western-blot结果为阳性;PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel重组质粒PCR验证结果 PB1、PA基因阳性;Western-blot检测PB1-GFP融合蛋白阳性;Co-IP结果表明流感病毒RNA聚合酶亚基PB1与PA在哺乳动物细胞内具有相互作用。结论基于RNA聚合酶亚基间相互作用的抗流感病毒药物筛选系统构建成功,可以用于抗流感病毒靶点特异性的高通量药物的筛选。
- 李娟房师松王昕吕星吴春利程小雯张仁利程锦泉郑青
- 关键词：酵母双杂交免疫共沉淀药物筛选
