国家自然科学基金(31370205)
- 作品数：16 被引量：53H指数：4
- 相关作者：杨洪江林书祥王维郭伟李胜英更多>>
- 相关机构：天津科技大学天津市儿童医院湖南省儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市卫生局科技基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 路德维希肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性
- 2019年
- 【背景】噬菌体能够特异性杀死宿主细菌,特别是耐药性细菌,可以作为新型杀菌剂,而关于路德维希肠杆菌噬菌体的研究尚属空白。【目的】分离路德维希肠杆菌噬菌体,并对其生物学特性进行研究。【方法】通过双层平板法分离、纯化、鉴定噬菌体;通过SDS-PAGE电泳分析结构蛋白;通过透射电子显微镜分析噬菌体的形态;通过结晶紫染色法和刚果红平板法分析生物被膜。【结果】以路德维希肠杆菌X20为指示菌从环境样品中分离获得了噬菌体GM20,噬菌斑透明且有较小晕环,直径大小平均为0.47 mm。透射电镜观察显示,噬菌体GM20具有可伸缩尾部,属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)。GM20的滴度为7.65×109^PFU/mL,为烈性噬菌体。一步生长曲线结果显示,噬菌体的潜伏期约为15 min,释放量约为164.3 PFU/infection center。进一步分析显示,GM20具有较好的抑菌效果,耐噬菌体菌株突变株平均突变率为1.06×10^-5。【结论】烈性噬菌体GM20能够杀死路德维希肠杆菌X20,有可能应用于路德维希肠杆菌感染的预防与控制。
- 龚梦馨孙庆惠张茜茜黄志伟杨洪江
- 关键词：生物学特性
- 天津地区KI和WU多瘤病毒在儿童急性呼吸道感染中的分子流行病学研究被引量：4
- 2017年
- 目的了解KI和WU多瘤病毒(KIPy V和WUPy V)与天津地区儿童急性呼吸道感染的关系。方法采用PCR扩增方法对2011年1月至2013年12月收集的3 730份来自天津地区的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行KIPy V和WUPy V基因检测,同时所有标本均用直接免疫荧光法检测7种常见呼吸道病毒。选取部分KIPy V和WUPy V PCR阳性产物进行测序,利用测序序列与已知序列比对并绘制进化树。再从中选取两株KIPy V VP1基因克隆到T载体上,进行序列测定和分析,并将核苷酸序列提交Gen Bank。结果 3 730份标本中,KIPy V阳性检出453份(12.14%),WUPy V阳性检出63份(1.69%)。KIPy V平均感染率在6~7月明显偏高,WUPy V平均感染率在2~3月达到一个小高峰。两种多瘤病毒感染的阳性患儿年龄主要集中在3岁以内。KIPy V和WUPy V与其他7种呼吸道病毒存在混合感染,混合感染率为2.31%(86/3 730);WUPy V和KIPy V混合感染9份。选取的35份KIPy V阳性PCR产物序列与Gen Bank已公布的KIPy V序列的同源性在94%~100%之间;选取的12份WUPy V阳性PCR产物序列与Gen Bank已公布的WUPy V序列的同源性在95%~100%之间。两株KIPy V VP1基因序列已被Gen Bank收录,登录号为KY465925和KY465926。结论天津地区部分儿童的急性呼吸道感染可能与WUPy V和KIPy V感染相关。KIPy V感染多发于夏季,WUPy V感染多发于春季。KIPy V和WUPy V与国内外流行株间差异较小,基因组相对稳定。
- 林书祥王维郭伟杨洪江马百成方玉莲徐永胜
- 关键词：WU多瘤病毒急性呼吸道感染儿童
- 住院呼吸道感染患儿博卡病毒检测分析被引量：11
- 2016年
- 目的了解人博卡病毒（HBoV）在天津地区急性呼吸道感染患儿中的检测情况和基因的遗传进化特征。方法收集2012年1~12月确诊为急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物标本1259份,提取病毒核酸,采用实时荧光定量PCR法检测HBoV,并采用PCR法扩增阳性标本HBoV核衣壳蛋白基因片段;随机选取部分产物进行测序确证,将所获得的序列与已知的HBoV基因序列进行比对并进行系统进化分析;同时对所有标本进行其他多种呼吸道相关病毒检测。结果 1259份标本中HBoV阳性检出率为4.53%（57/1259）,其中75%（43/57）发生在6~36月龄的患儿;检出高峰主要集中在夏季（6~8月）;存在与其他病毒的混合感染情况。对其中36份阳性标本的PCR产物进行序列分析,证实检测结果确为HBoV,且与已知HBoV的基因序列同源性较高。结论天津地区部分儿童的急性呼吸道感染可能与HBoV感染相关,且HBoV感染在6~36月龄的婴幼儿中更为常见,夏季为流行高峰;系统进化分析显示与已知HBoV的基因序列同源性高,基因序列变异较小。
- 王维林书祥李胜英侯晓巨黄敬孚祝益民杨洪江
- 关键词：人博卡病毒急性呼吸道感染儿童
- 铜绿假单胞菌噬菌体K5中DNA聚合酶等基因在宿主中的表达
- 2014年
- 本研究分析了铜绿假单胞菌噬菌体K5基因在宿主中的表达及其影响因素.通过测定融合报告基因dnaP-lacZ、capP-lacZ、bapP-lacZ和rdr-lacZ编码的β-半乳糖苷酶活力,分析了噬菌体K5相关基因的表达水平,发现噬菌体K5的不同基因在宿主细胞内表达水平存在较大差异,其中噬菌体K5的DNA聚合酶基因dnaP的表达水平最高,而主要衣壳蛋白基因capP的表达水平最低.加入噬菌体后,除二磷酸核糖核苷酸还原酶基因rnr外,其它基因的表达水平均有明显提高,说明噬菌体自身因子能够调控噬菌体部分基因在宿主细胞中的表达.进一步分析显示,噬菌体基因在对数生长前期细胞中的表达水平显著高于平衡期.同时,噬菌体感染对数生长前期的宿主菌,其释放量为12.8 PFU/感染中心,是平衡期释放量的9.2倍.噬菌体以对数生长期宿主为指示菌时噬菌体的滴度为4.7×108PFU/mL,而以平衡期宿主菌为指示菌噬菌体K5滴度仅能达到2.5×104PFU/mL,噬菌体K5的裂解能力显著降低.这些结果对研究噬菌体与宿主细胞的相互作用机制具有重要作用.
- 秦旭颖陈岩林书祥杨洪江
- 关键词：铜绿假单胞菌噬菌体释放量
- 儿童急性呼吸道和消化道脑心肌炎病毒感染的检出和临床流行特征被引量：3
- 2016年
- 目的调查国内儿童急性呼吸道和消化道感染中是否存在脑心肌炎病毒（EMCV）感染。方法对2013年1月至12月天津市儿童医院收集的577份急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物和384份消化道感染患儿粪便标本，以针对EMCV5’-UTR基因序列设计的特异性引物进行荧光定量PCR扩增，随机挑选阳性扩增产物进行核苷酸序列测定，并将所测序列在GenBank中进行比对。同时对所有标本进行其他多种呼吸道、消化道相关病毒检测。采用直接免疫荧光测定法检测7种常见呼吸道病毒；金标法检测轮状病毒、腺病毒；酶标法检测星状病毒；PCR方法检测鼻病毒、多瘤病毒wu、多瘤病毒Kl、人博卡病毒、诺如病毒、肠道病毒、Aichi病毒及双埃可病毒；实时荧光定量PCR法检测心病毒。结果577份鼻咽抽吸物标本检测出7例EMCV阳性，阳性率为1．2％。患儿年龄均在6个月以内，检出季节为秋季和冬季；384份粪便标本检测出11例EMCV阳性，阳性率为2．9％。患儿集中在1岁以内及4—7岁，除春季外，其他3个季节均有检出。阳性患儿呼吸道及胃肠道症状以发热、腹泻为主，与其他呼吸道及肠道病毒感染类似。88．9％（16／18例）的患儿居住在郊县和农村。其中5例样本存在与合胞病毒、腺病毒、心病毒和诺如病毒的混合感染。混合感染患儿性别、年龄、住院时间、病情严重程度与单纯EMCV感染患儿相比，均无明显差异。结论中国儿童存在EMCV感染，与呼吸道和消化道感染相关，需进一步检查其他感染是否与EMCV有关。
- 王维黄敬孚林书祥司萍李胜英黄金海祝益民杨洪江
- 关键词：脑心肌炎病毒急性呼吸道感染消化道感染儿童
- 儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用被引量：18
- 2018年
- 目的通过采用RNA恒温扩增（SAT）技术，对肺炎患儿的肺泡灌洗液标本进行检测，并结合体外培养实验，评估该技术检测活菌的能力，为SAT技术在肺炎支原体（MP）肺炎诊疗中的应用提供理论支持。方法收集天津市儿童医院2015年10月至2017年12月临床确诊为社区获得性肺炎的572例患儿的肺泡灌洗液，利用MP核酸定量和SAT技术检测MP感染情况，并对161份肺泡灌洗液进行分离培养，培养阳性菌液中持续加入高浓度抗生素，同时进行MP核酸定量和SAT技术检测。结果MP核酸定量和SAT技术的MP阳性检出率分别为74.7%（427/572）和71.9%（411/572），两种检测方法具有很高的一致性（χ2＝1.142，P＝0.285）。根据SAT技术的检测结果，572例肺炎患儿中男性患儿阳性率为72.7%（224/308），女性患儿阳性率为70.8%（187/264），不同性别患儿阳性率差异无统计学意义（χ2＝0.252，P＝0.616）。不同年龄患儿MP检出阳性率不同，婴幼儿（≤3岁）阳性率为56.6%（94/166），学龄前期和学龄期儿童（4～14岁）阳性率为78.1%（317/406），学龄前期和学龄期儿童的阳性率明显高于婴幼儿，差异有统计学意义（χ2＝26.811，P＝0.000）。通过SAT技术检测活菌的能力的实验发现，MP阳性培养液中连续5 d加入5 MIC阿奇霉素后，MP核酸定量检测阳性，SAT技术检测则为阴性。结论SAT技术具有高灵敏度和高特异性，并且可以鉴别＂死菌＂＂活菌＂，可以快速准确检测MP感染情况，并能有效评估临床治疗效果。
- 林书祥马百成王维王朝郭伟徐勇胜
- 关键词：肺炎支原体支气管肺泡灌洗液核酸扩增技术微生物敏感性试验
- 铜绿假单胞菌D1产鼠李糖脂及降解原油效果被引量：3
- 2016年
- 铜绿假单胞菌是生物表面活性剂鼠李糖脂最主要的生产菌株,对石油增溶、降解有很好的效果.从轻质原油样品中富集分离获得菌株D1,利用CTAB-亚甲基蓝平板法初步确定该菌株可以合成鼠李糖脂,分析其16S rRNA基因序列确定菌株D1属于铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).以菜籽油和甘油为碳源,菌株D1能够分别合成18.4 g/L和11.4 g/L鼠李糖脂.分析菌株D1可利用碳氢化合物种类,发现在以原油和柴油的培养基中,D1细胞数量分别增加了39.2倍和33.9倍.在10 d培养过程内,菌株D1能够分解基本培养基中33.3%的原油.相同时间内,补加0.5 g/L的甘油,菌株D1能够分解培养基中71.8%的原油.上述表明菌株D1能够合成鼠李糖脂和有效地降解原油,在石油污染的生物修复方面具有较好的应用潜力.
- 张翠坤杨白雪常冬妹杨洪江
- 关键词：铜绿假单胞菌鼠李糖脂原油降解碳氢化合物
- 黑曲霉纤维二糖水解酶基因cbhA在毕赤酵母中异源表达被引量：3
- 2017年
- [目的]对黑曲霉纤维二糖水解酶cbhA基因进行了克隆和在毕赤酵母中的真核表达。[方法]采用PCR方法扩增黑曲霉纤维二糖水解酶A(Cellobiohydrolase A,CBHA)基因,获得的DNA序列与cbhA基因表现出高度相似,推导出的氨基酸序列与真菌CBHA酶也高度相似,属于糖基水解酶第7家族。将扩增得到的cbhA基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,与α-因子信号肽序列形成融合蛋白,进一步通过电转化方法将线性化质粒p PIC9K-cbhA转化至毕赤酵母GS115菌株进行表达。[结果]在甲醇诱导下,重组菌株CMC比酶活力是对照的2.5倍,SDS-PAGE分析结果也确认了cbhA基因在重组菌株GS115/p PIC9K-cbhA中的表达。对该酶性质的分析表明,重组CBHA酶水解CMC底物最适p H值为5.0,最适温度为55℃。[结论]黑曲霉纤维二糖水解酶基因cbhA的克隆和其真核表达工程菌株的构建,为获得纤维二糖水解酶A高产菌株,实现纤维素酶多组分的人工组装奠定了基础。
- 秦慧彬李梦菲杨洪江
- 关键词：黑曲霉毕赤酵母异源表达
- 类志贺邻单胞菌噬菌体ФP4-7裂解酶Gp2的表达及活性测定被引量：2
- 2017年
- 多重耐药菌株的出现给临床治疗带来了困难,噬菌体编码的裂解酶能够杀死病原菌,是潜在的重要杀菌因子.本实验采用PCR技术,扩增类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)噬菌体ФP4-7裂解酶gp2基因并克隆至质粒p QE30上进行表达,重组蛋白采用Ni-NTA亲和层析法进行纯化.重组裂解酶Gp2最适反应p H为9;裂解酶40,℃保温15,min,酶活剩余56.4%,.底物专一性实验结果显示,该裂解酶能够高效裂解5种革兰氏阴性菌,即铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii),以及3种革兰氏阳性菌,即金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis).杀菌实验结果表明,裂解酶Gp2可与EDTA、LAB-35以及SDS配合使用,进一步提高该酶对铜绿假单胞菌和枯草芽胞杆菌的杀菌活性.裂解酶Gp2具有高效广谱裂菌活性,具有潜在的应用价值.
- 何洋荆兆元杨洪江
- 关键词：杀菌活性
- 天津地区儿童急性呼吸道和消化道感染Saffold病毒的检出和临床流行特征被引量：3
- 2016年
- 目的调查天津地区儿童急性呼吸道和消化道感染中是否存在Saffold病毒(SAFV)感染及其流行病学特征。方法收集360份急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物和384份消化道感染患儿粪便标本,以针对SAFV 5′-UTR基因序列设计的特异性引物进行荧光定量PCR扩增,随机取阳性扩增产物进行核苷酸序列测定,并将所测序列在Gen Bank中进行比对。计算呼吸道和消化道SAFV感染阳性者的阳性率,不同年龄段及季节的SAFV阳性构成比和阳性检出率。同时考察SAFV与其他病毒的混合感染情况。结果呼吸道和消化道检测SAFV阳性率分别为11.9%(43/360)和16.4%(63/384)。不同性别的呼吸道SAFV阳性检出率差异无统计学意义[男、女分别为11.5%(28/243)和12.8%(15/117),χ2=0.13,P>0.05],年龄6 d^12岁,<1岁者占79.0%(34/43);消化道检测SAFV阳性患儿阳性检出率差异有统计学意义[男、女分别为13.4%(33/246)和21.7%(30/138),χ2=4.47,P<0.05],年龄5 h^11岁。不同年龄段的呼吸道和消化道SAFV阳性检出率差异均无统计学意义。不同季节呼吸道SAFV阳性检出率差异有统计学意义,以冬季和夏季为主(P<0.01),而消化道SAFV阳性检出率差异无统计学意义。呼吸道和消化道SAFV与其他病毒混合感染率分别为7.0%(3/43)和12.7%(8/63)。结论天津地区儿童存在SAFV感染,在急性呼吸道和消化道感染患儿中具有较高的阳性检出率,且在1岁以内患儿中的阳性检出率较高,应该引起临床重视。
- 王维黄敬孚林书祥司萍李胜英祝益民杨洪江
- 关键词：呼吸道感染胃肠道流行病学研究儿童
