北京市自然科学基金(7012007)
- 作品数：7 被引量：27H指数：4
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- 相关机构：北京肿瘤医院宁夏医学院北京大学临床肿瘤学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人Norpeg蛋白的原核表达及其抗体的制备
- 2005年
- 目的原核表达NorpegC端编码区并制备小鼠抗Norpeg多克隆抗体。方法将Norpeg基因C端编码区克隆进原核表达载体pGEX4T-1中,转化E.coli,以IPTG诱导重组蛋白的表达。以纯化的重组目的蛋白作为免疫原免疫小鼠,制备相应的多克隆抗体。结果成功构建原核表达载体,表达了重组蛋白并制备了小鼠抗Norpeg多克隆抗体。结论人NorpegC端编码区能够在体外大肠杆菌中获得融合表达,制备的小鼠抗Nor-peg多克隆抗体特异性较高,为下一步深入Norpeg功能研究提供了重要基础。
- 孙玉宁靳更林李燕寿成超
- 关键词：多克隆抗体
- 六种支原体单克隆抗体的制备与鉴定
- 2006年
- 目的制备针对临床常见的六种支原体的特异性单克隆抗体,为临床支原体感染检测提供工具。方法用灭活的支原体颗粒免疫BALB/C小鼠,通过传统杂交瘤技术制备抗支原体单克隆抗体,采用6种支原体蛋白以酶联免疫吸附试验(ELISA)进行交叉筛选,并用免疫印记法(WB)对其特异性进行鉴定。结果获得针对生殖支原体、梨形支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、肺炎支原体、穿透支原体的特异性单克隆抗体各1株,经ELISA检测证实具有较好的反应特异性,其中,单抗MG6H1、MPRI ZW1和MPE6G4在WB中也同时分别与生殖支原体、梨形支原体和穿透支原体呈特异反应。结论获得针对6种人体常见感染支原体的不同单克隆抗体,它们在ELISA检测中具较好的反应特异性,有望应用于支原体感染检测。
- 杨文君张建芝李燕张艳丽寿成超
- 关键词：支原体属酶联免疫吸附测定
- 胃癌组织中猪鼻支原体的分离培养与鉴定被引量：15
- 2003年
- 目的 获得胃癌组织中存在猪鼻支原体感染的直接证据。方法 收集新鲜的胃癌手术标本 2 0例 ,利用PPLO培养基从胃癌组织中分离培养猪鼻支原体 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测阳性培养产物中猪鼻支原体的特异性基因序列片段。结果 除 1例标本细菌污染外 ,1 9例胃癌组织中有 4例获得阳性培养产物 ,阳性率为 2 1 1 % ;该 4例阳性培养物中均扩增出猪鼻支原体的特异性序列片段。结论 胃癌组织中存在猪鼻支原体感染 ,说明猪鼻支原体对人亦具感染性。
- 马华崇马泓张艳丽季加孚王怡李吉友徐光炜寿成超
- 关键词：胃癌癌组织
- 猪鼻支原体P37蛋白相互作用蛋白的筛选与鉴定被引量：4
- 2004年
- 既往工作表明 ,胃癌组织中有较高的猪鼻支原体感染率 ,猪鼻支原体的主要膜蛋白P37能够诱导外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子 (TNF) .为了深入研究P37的作用机制 ,利用酵母双杂交系统筛选与P37蛋白相互作用的蛋白质分子 .首先 ,将编码P37全长的cDNA克隆到 pGBKT7载体中 ,构建“诱饵”表达载体 pGBKT7 p37,以此筛选人胎盘组织cDNA表达文库 .在 2 6× 10 6个克隆中 ,筛选到一株能与P37相互作用的阳性克隆 ,序列测定表明 ,该阳性克隆编码人视网膜色素上皮细胞蛋白 (Norpeg蛋白 ) .在此基础上经GST PullDown实验 ,进一步证实Norpeg蛋白确能与P37相互作用 ,为进一步研究P37对细胞的作用机制奠定了基础 .
- 孙玉宁靳更林张建芝吴健寿成超
- 关键词：酵母双杂交
- 支原体感染与肿瘤被引量：8
- 2004年
- 支原体是广泛存在于自然界的条件致病微生物,可能是唯一可以与真核生物共生,并可与哺乳动物细胞长期相互作用的原核生物。多种不同的肿瘤组织中可检测到支原体的存在,某些支原体的持续感染可导致哺乳动物细胞的转化、上调癌基因的表达并引起肿瘤细胞生物学行为的改变,提示支原体感染与肿瘤的发生有潜在的相关性。
- 宁金鹰寿成超
- 关键词：支原体感染肿瘤原核生物癌基因基因表达
- 抗猪鼻支原体单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的 :制备抗猪鼻支原体 (M .hyorhinis,M .hy)的单抗隆抗体 (monoclonalantibody ,McAb) ,为相关研究提供工具。方法 :用灭活的猪鼻支原体免疫BALB/c小鼠 ,运用传统的细胞融合技术制备抗猪鼻支原体单克隆抗体。单抗鉴定采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)和免疫组织化学 (immunohistochemistry ,IHC)方法。结果 :经ELISA筛选获得了一株抗猪鼻支原体的单克隆抗体 ,该抗体亚类为IgG2b。ELISA结果表明该单抗仅与猪鼻支原体反应而与肺炎支原体和发酵支原体不反应。用经PCR检测支原体阳性的胃癌切片做免疫组化 ,结果显示 ,该抗体能与PCR阳性的胃癌组织切片产生特异性反应。结论 :获得一株抗猪鼻支原体特异性单克隆抗体 ,可为相关研究提供工具。
- 张艳丽孟麟李燕寿成超
- 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附实验免疫组织化学
- 猪鼻支原体蛋白P37诱导人外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子被引量：4
- 2003年
- 胃癌组织中存在较高的猪鼻支原体感染率,提示猪鼻支原体感染同胃癌的发生可能存在某种相关性.由于肿瘤坏死因子(TNF-α)在微生物感染导致肿瘤发生中起重要作用,而P37蛋白是猪鼻支原体的主要免疫原,因此,探讨P37能否诱导TNF-α的表达与释放,对阐明猪鼻支原体在胃癌发生中的可能分子机制有重要意义,运用PCR技术克隆了p37基因,在对其编码序列中7个色氨酸密码子TGA进行TGG定点突变后,利用PGEX-4T-1表达载体在大肠杆菌中成功表达了P37蛋白,并经Western blot得到证实,在此基础上,利用RT-PCR及TNF-α敏感细胞株L929的细胞毒性实验,发现P37确能诱导外周血单核细胞表达和释放TNF-α,抗P37单克隆抗体PD4对该诱导活性有明显的中和作用,结果提示,猪鼻支原体通过P37诱导TNF-α产生在猪鼻支原体感染所致相关疾病中可能起重要作用,值得进一步研究.
- 宁金鹰黄甦吴健孟麟寿成超
- 关键词：人外周血单核细胞肿瘤坏死因子TNF-Α胃癌
