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核酸适体和胶体金检测皮质醇含量的方法与应用被引量：2: 2012年; 目的通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得皮质醇特异性核酸适体,应用核酸适体和胶体金建立一种灵敏的定量检测皮质醇含量的方法。方法采用柠檬酸钠还原法和硼氢化钠还原法制备胶体金,用核酸适体、胶体金聚集显色法检测皮质醇含量。结果相比20 nm胶体金,采用5 nm和13 nm胶体金颗粒具有较好的灵敏度、重复性和线性范围,5 nm胶体金颗粒用于皮质醇的检测的线性范围为10.1～320μmol/L,标准曲线相关系数r为0.9993,其重复性较好,标准差小于平均值10%。结论本实验建立了一种高灵敏性的能特异性地检测皮质醇标准品含量的方法。; 张岭弓景波王瑜石卿刘伟丽梅竹松钱令嘉姚林; 关键词：皮质醇核酸适体胶体金

睡眠剥夺应激对大鼠海马的损伤作用及其对探究行为的影响被引量：5: 2011年; 目的观察睡眠剥夺应激对大鼠海马的损伤作用,并研究其对大鼠探究行为的影响。方法以改良多平台水环境(MMPM)建立睡眠剥夺模型,设大平台对照组和睡眠剥夺组。分别记录各组大鼠体质量、血浆糖皮质激素(GC)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平以及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化;常规HE染色法观察海马损伤情况;旷场实验确定大鼠自主探究能力。结果睡眠剥夺5 d和7 d后大鼠血浆GC含量和LDH活性均显著高于对照组。睡眠剥夺3 d后血浆中NSE水平明显高于对照组,并有随时间延长而逐渐升高的趋势。病理染色和旷场实验显示,睡眠剥夺3 d后大鼠即出现海马损伤和探究行为评分降低。结论睡眠剥夺对大鼠海马具有明显的损伤作用,可能是睡眠剥夺大鼠自主探究行为下降的重要原因。; 王新兴梅竹松刘伟丽张志清武磊弓景波钱令嘉; 关键词：睡眠剥夺海马损伤

正心力颗粒对睡眠剥夺导致的认知能力和应激适应能力下降的改善作用: 2011年; 目的对中药复方正心力颗粒改善机体应激适应能力的效能进行初步临床观察。方法以72 h睡眠剥夺为应激源,采用放射免疫法测定机体血浆皮质醇水平,免疫印迹法测定外周血淋巴细胞热休克蛋白70(Hsp70)水平,并分别以视觉反应时、记忆广度及闪光融合频率反映机体的反应能力、短时记忆能力和大脑皮质疲劳状况。结果睡眠剥夺后,机体血浆皮质醇水平升高(23.8±4.5)%,外周血淋巴细胞Hsp70表达增强,记忆能力和应激反应能力明显下降;正心力颗粒可抑制应激所致皮质醇的过量释放,诱导Hsp70的激活,显著增强应激机体的记忆能力和应激反应能力,纠正大脑皮质疲劳的发生;且安全无毒。结论中药正心力颗粒具有较强的应激损伤防护功能,并具有明显提高机体应激适应能力和脑体作业能力的作用。; 弓景波王新兴赵云战锐吴淑庆钱令嘉; 关键词：应激

同型半胱氨酸促进平滑肌细胞增殖与凋亡的线粒体机制被引量：4: 2016年; 目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对主动脉平滑肌细胞线粒体功能的影响作用。方法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,将其分为10组:对照组,同型半胱氨酸低剂量干预组(0.01 mmol/L),同型半胱氨酸中剂量干预组(0.1 mmol/L分别干预24,48,72 h),同型半胱氨酸高剂量干预组(1 mmol/L分别干预24,48,72 h)。生物化学法试剂盒测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH),MTT法测定平滑肌细胞增殖率;分别采用荧光素-荧光素酶发光法测定线粒体ATP合成的速率;荧光探针和流式细胞术测定线粒体膜电位水平;生物耗氧仪测定线粒体耗氧率。结果:Hcy干预48 h后,平滑肌细胞出现增殖效应,并且随干预剂量的增加而逐渐增加。中高剂量Hcy干预48 h后,细胞培养液中LDH活性既显著升高(P<0.05)。线粒体功能检测显示,低剂量Hcy干预的平滑肌细胞显示轻微的ATP合成酶活性升高和耗氧量的增加(P<0.05),而中剂量和高剂量Hcy干预平滑肌细胞的则出现显著的ATP合成酶活性下降、耗氧量减少以及线粒体膜电位的降低(P<0.05)。高剂量Hcy干预平滑肌细胞Caspase-3活性明显高于对照组。结论:低浓度的Hcy即可引起主动脉平滑肌细胞增殖效应,高浓度Hcy可导致平滑肌细胞发生损伤,其机制可能与线粒体能量代谢受损有关。; 沈成凤刘伟丽刘晓华王静王尚王新兴; 关键词：同型半胱氨酸平滑肌细胞线粒体

血浆HSP70可作为军事应激负荷的重要生物标志物的研究被引量：2: 2014年; 目的探索血浆热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)作为军事应激负荷生物标志物的可行性。方法采用ELISA方法检测海军某部执行长远航任务6个月后官兵血浆中的HSP70水平的变化,采用应激评定问卷和自测健康评定量表调研其应激负荷及健康状态。结果与未执行任务组相比,执行长远航任务官兵血浆HSP70水平升高31.40%,思维和焦虑水平、负性情绪、躯体症状指标均显著高于正常水平,生理健康、心理健康和社会健康状况低于正常水平,血浆HSP70水平的升高与应激水平的升高密切相关。结论血浆HSP70水平可作为军事应激负荷评价的重要指标,为军事应激损伤预警提供科学支撑。; 杲修杰王新兴弓景波赵云刘伟丽梅竹松张灿钱令嘉; 关键词：应激自测健康量表热休克蛋白70

靶标诱导变构解离SELEX技术筛选皮质醇特异核酸适体被引量：3: 2011年; 目的通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得皮质醇特异性核酸适体,建立高品质、超敏、易用和稳定的皮质醇检测试剂盒。方法人工合成两端固定序列,中间为35 bp随机序列,生成80 bp长度ssDNA文库,捕获序列固定在磁珠上,文库与其退火组装,皮质醇的特异核酸适体通过我们建立的靶标诱导变构解离SELEX(TISSD-SELEX)技术获得。最后一轮的PCR产物经克隆测序,MegAlign和RNAstructure软件分析其一级和二级结构。实时(real-time)apta-PCR方法分析G12的亲和活性。结果经过12轮筛选后,获得10个皮质醇的核酸适体。序列分析显示,特异核酸适体以高G含量核酸序列为主,软件预测其中8个序列主要以G四联体二级结构为主,候选核酸适体G12显示了可以作为生物探针用于皮质醇检测。结论成功建立TISSD-SELEX技术,获得小分子靶标皮质醇核酸适体。小分子靶标无需将其偶联在固相介质或大分子上,对靶分子结构、性质无特殊要求,因而有望成为小分子靶标核酸适体筛选的通用技术方法。; 张岭王新兴战锐弓景波钱令嘉; 关键词：SELEX 皮质醇核酸适体

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国家自然科学基金(81000584)

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