国家自然科学基金(20576010)
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
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- Hepc20在毕赤酵母中的胞内表达及鉴定被引量：1
- 2010年
- 构建了Hepc 20的毕赤酵母表达载体,在毕赤酵母中能成功表达有活性的Hepc 20。优化了菌株的培养诱导条件,结果表明BMMY培养基是Hepc 20表达和重组菌株生长的最佳培养基,甲醇诱导终体积分数0.5%,在此条件下Hepc 20在重组菌株中的表达量约为3.6 mg/L。Western blot检测显示的22000处的条带为重组Hepc 20条带;ELISA验证表明重组Hepc 20可以跟抗体特异结合,琼脂扩散法抗菌实验表明重组Hepc 20对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌表现出抗菌活性。
- Farzana RASHID袁其朋孙新晓李飞
- 关键词：抗菌肽铁毕赤酵母
- 角鲨烯合成酶特异性mU6-siRNA真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2007年
- 利用RNA干扰技术靶向构建角鲨烯合成酶基因ERG9特异性真核表达载体。将针对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe Linder)ERG9不同部位所设计的3对siRNA序列通过重组技术克隆到质粒mU6 pro中构建真核表达重组体mU6 ERG9 siRNA1、2、3,转化DH5α菌株扩增,提取质粒通过限制性酶切和测序分析对重组表达载体进行鉴定,分析结果表明3个表达载体的设计基因插入正确,成功构建了ERG9特异性真核表达载体mU6 ERG9 siRNA,重组体的成功构建为在裂殖酵母细胞中靶向RNA干扰角鲨烯的合成从而提高辅酶Q10合成途径的代谢通量打下基础。
- 李文进袁其朋李晔程冰
- 关键词：RNA干扰辅酶Q10
- Hepcidin的基因克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达被引量：11
- 2007年
- 根据已知hepcidin氨基酸序列,参照毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性,设计合成了hepcidin目的基因。所合成的hepcidin基因全长96bp,其5′端引入KEX2基因产物(Kex2)的特异性识别位点序列,以保证表达产物具有天然N端。通过基因重组的方法将hepcidin基因克隆到pPicZαA载体中,构建了分泌型重组酵母表达载体pPICZαA-Hepc,经电转至毕赤酵母GS115中表达。使用浓度高达1500μg/mL的Zeocin筛选得到高拷贝插入GS115菌株,经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液有明显的hepcidin表达,表达量达到100mg/L。初步抗菌特性研究表明,该表达产物对枯草芽孢杆菌有明显的抑菌作用,而对大肠杆菌抑菌效果不明显。
- 张卉袁其朋
- 关键词：HEPCIDIN毕赤酵母分泌表达抗菌活性
- 三孢布拉霉菌中辅酶Q9的分离与鉴定
- 2009年
- 从三孢布拉霉菌菌丝体中分离提取辅酶Q,经硅胶柱和制备色谱纯化后纯度达98%。样品在Craven反应中显蓝色,紫外光谱扫描在275nm处有最大吸收,高效液相分析显示样品保留时间比辅酶Q10的略小。红外光谱谱图表明样品具有辅酶Q9的特征化学键和分子结构,电喷雾质谱(ESI/MS)确定了所分离的辅酶Q分子量[M+H]为795.8,以上结果表明,本实验室所保存的三孢布拉霉菌菌丝体内的泛醌存在形态是辅酶Q9,这为后续的发酵生产和药物合成研究奠定了重要的工作基础。
- 程冰袁其朋吕健龙
- 关键词：三孢布拉霉菌辅酶Q硅胶高效液相色谱
- 人类抗菌肽hepcidin在毕赤酵母中的分泌表达和纯化被引量：4
- 2009年
- 报道了一种低分子量的人类抗菌肽hepcidin基因的克隆、表达以及纯化。试验证明在毕赤酵母中能成功分泌有活性的hepcidin,hepcidin在重组菌株中的表达量约为3 mg/L,Western blot显示2.2 kD的重组hepcidin条带,重组hepcidin通过凝胶过滤及反向高效液相色谱纯化,质谱验证,重组蛋白对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌表现出抗菌活性。
- Farzana RashidIjaz Ali袁其朋孙新晓李文进李飞
- 关键词：抗菌肽HEPCIDIN铁毕赤酵母分泌表达
- 抗氧化剂对根瘤土壤杆菌细胞破碎的研究
- 2006年
- 考察了研磨法、有机溶剂法和超声波破碎法对根瘤土壤杆菌细胞破碎的影响。结果表明,在有机溶剂破碎条件下,最佳搅拌时间为3.5 h,此时CoQ10的含量为5.703 mg/L;由正交实验分析得出,菌体浓度为40 mg/mL,作用时间为12 min,破碎功率为250 W时,超声波破碎的效果最佳;与上述两种常规破碎方法比较,在研磨的条件下,加入抗氧化剂BHT(2,6-二叔丁基对甲酚)的细胞破碎效果最好,CoQ10的含量为8.012 mg/L,比不加抗氧化剂BHT研磨时提高了约38%,抗氧化剂BHT的最佳质量分数为20%。
- 栾美丽袁其朋
- 关键词：辅酶Q10抗氧化剂BHT
- 紫罗酮和麦角固醇对酵母生长及产辅酶Q_(10)的影响被引量：1
- 2006年
- 研究了β-紫罗酮和麦角固醇对酵母生长及产辅酶Q10的影响。研究发现,β-紫罗酮能促进菌体积累辅酶Q10,当培养基中β-紫罗酮的添加量为0·208×10-3mol/L时,菌体中CoQ10的含量提高了28·3%;少量麦角固醇能促进菌体产辅酶Q10,当麦角固醇的添加量为0·15×10-4mol/L时,菌体中CoQ10的含量提高了31·8%,而增加麦角固醇的添加量为0·60×10-4mol/L时则会抑制菌体产辅酶Q10;同时添加β-紫罗酮和麦角固醇时,菌体中CoQ10的含量提高了36·1%。研究结果表明,β-紫罗酮和麦角固醇能有效地促进菌体产辅酶Q10,这为发酵法生产辅酶Q10提供了一条新的研究思路。
- 左智洁袁其朋
- 关键词：辅酶Q10麦角固醇
- Hepcidin的生物学特性及其研究进展被引量：4
- 2006年
- Hepcidin是一种由肝脏合成的富含半胱氨酸的小分子肽。近几年的研究证实hepcidin对于调节机体铁离子的代谢平衡发挥着重要的作用,其可抑制肠道铁吸收和单核巨噬细胞系统铁释放。此外,除了机体铁状况,感染、炎症、贫血和缺氧等原因也会改变hepcidin的表达水平。通过对hepcidin的分子生物学特点、表达调控及生物活性、医学及药用价值等方面研究进展的概述,对采用基因工程的方法生产hepcidin进行了评述及展望。
- 张卉袁其朋
