国家自然科学基金(30270491)
- 作品数：48 被引量：220H指数：8
- 相关作者：姜晓丹徐如祥蔡颖谦邹雨汐杜谋选更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学佳木斯大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Nurr1基因在体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞的表达被引量：2
- 2005年
- 目的获得表达孤儿核受体(Nurr1)基因的骨髓源性神经干细胞(BMSCs-NSCs)。方法构建携带Nurr1基因的重组腺相关病毒(AAV)载体AAV-pcDNA3.1-Nurr1,提取质粒,用脂质体转染法转染大鼠BMSCs-NSCs,并用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测阳性细胞。结果经酶切鉴定和DNA测序,证实得到了序列正确的重组pAAV-Nurr1,获得了Nurr1阳性的BMSCs-NSCs。结论重组AAV携带的Nurr1基因能够在BMSCs-NSCs中表达,本研究为进一步探讨将该基因工程细胞用于帕金森病基因治疗提供了可能性。
- 姚谦明徐如祥姜晓丹蔡颖谦
- 关键词：腺相关病毒骨髓源性神经干细胞
- 神经干细胞基因转导治疗帕金森病的研究进展被引量：5
- 2003年
- 随着神经干细胞研究的逐渐成熟,神经干细胞移植是未来治疗帕金森病的主要发展方向。本文就近年来神经干细胞的来源、基因转导和移植治疗帕金森病等方面的研究进展予以综述。
- 徐强
- 关键词：帕金森病神经干细胞TH基因基因治疗
- 人酪氨酸羟化酶转染骨髓源神经干细胞获稳定表达的研究被引量：6
- 2004年
- 徐强徐如祥姜晓丹张世忠郭再玉
- 关键词：转染骨髓源神经干细胞细胞移植帕金森病
- 大鼠骨髓源性神经干细胞NCAM受体标记检测及超微结构实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨神经细胞黏附分子(NCAM)受体作为大鼠骨髓源性干细胞检测标志,并利用原子力显微镜(AFM)扫描培养不同时段的细胞,获得细胞表面特异性超微结构。方法分离SD大鼠骨髓基质细胞,用神经干细胞培养基、脑源性神经细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维甲酸持续诱导培养,在诱导培养后第6、8、10和12天应用SABC法免疫组化技术,检测NCAM受体表达情况;并对诱导培养后的细胞进行AFM扫描,检测细胞表面的形貌结构。结果光学显微镜下可见NCAM受体在诱导培养后第10天已经有表达。细胞超微结构的扫描测定显示细胞表面平均粗糙度在(11.2±1.5)nm,骨髓源性神经干细胞发育不同时段的细胞表面特征主要表现为细胞中央部表面粗糙而周边部光滑,细胞周边部均存在云雾状结构。结论NCAM受体可以作为大鼠骨髓源性神经干细胞的表面标记;AFM超微结构的明确,为进一步鉴定骨髓源性神经干细胞提供可能。
- 王春华金维哲姜晓丹刘月霞徐如祥蔡颖谦
- 关键词：骨髓基质细胞干细胞显微镜检查
- 兔骨髓基质细胞核移植的初步研究被引量：4
- 2005年
- 目的通过建立骨髓基质细胞核移植的方法,为进一步从克隆囊胚的内细胞团细胞分离培养出全能性的胚胎干细胞并用于治疗性克隆等研究奠定基础。方法超排获得的兔成熟卵母细胞去核后,将同种的单个骨髓基质细胞核注入其内;电融合后,经离子霉素(ionomycin)和6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)激活,用10%胎牛血清(FBS)的TCM-199进行体外培养直至囊胚阶段。结果实验对147个卵母细胞去核,去核成功率为70.75%(104/147);注核后有82.69%(86/104)的卵细胞保持形态完整;重构后的体细胞-卵母细胞质复合体经电融合后的融合率为56.79%(46/81);激活后的重构胚于体外培养后分裂率为65.22%(30/46),囊胚率为17.39%(8/46),获得的囊胚有62.5%(5/8)进入孵化阶段;孵化出来的细胞贴壁生长并向周围扩展,显示了具有向下一阶段发育的潜能,为从囊胚内细胞团细胞中分离并培养出胚胎干细胞提供了可能。结论实验结果表明,以兔成体体细胞的骨髓基质细胞为核供体,经克隆技术生产出囊胚并从中分离内细胞团细胞具有可行性。
- 尚江华徐如祥姜晓丹雷安民邹雨汐秦玲莎滕晓华郑行崔胜
- 关键词：骨髓基质细胞核移植治疗性克隆
- 人间充质干细胞免疫原性研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨人间充质干细胞(hMSCs)特性及免疫原性,为进一步研究hMSCs移植特性提供实验依据。方法免疫组化方法鉴定hMSCs表面HLA-ABC、HLA-DR、CD80、CD86分子;流式细胞术检测其含量;RT-PCR检测HLA-ABC、HLA-DRmRNA基因片断;外周血淋巴细胞杀伤试验及 CCK-8比色法规察淋巴细胞增殖反应;将表达绿色荧光蛋白(GFP)的DNA复合物导入hMSCs进行大鼠脑内移植,观察hMSCs在脑内的存活情况。结果 hMSCs表面少量表达HLA-ABC分子,不表达 HLA-DR、CD80、CD86分子;有少量HLA-ABC mRNA基因片断存在,未发现HLA-DR mRNA基因片断;外周血淋巴细胞杀伤试验没有发现淋巴细胞增殖反应;大鼠脑内移植hMSCs一个月后仍可见有细胞存活。结论 hMSCs具有较弱的免疫原性。
- 肖炳祥姜晓丹徐如祥邹志浩邹雨汐
- 关键词：人间充质干细胞免疫原性
- 葡萄球菌蛋白A胶体金分子三维构象的原子力显微镜分析
- 2004年
- 目的 确定葡萄球菌蛋白A胶体金分子特征性构象。 方法 应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的葡萄球菌蛋白A胶体金分子 ,并进行理论计算。 结果 葡萄球菌蛋白A胶体金分子为 5 7.0 0nm× 33.0 0nm× 2 1.6 1nm椭圆球形“左轮手枪状”复合物。 结论 原子力显微镜可以在生理状态下直观测定生物大分子纳米尺度结构。葡萄球菌蛋白A胶体金分子的特征性结构可以作为神经细胞膜表面N -甲基 -D -天冬氨酸受体 (NMDAR)原子力显微镜观测的原位标记物。
- 郁毅刚徐如祥姜晓丹柯以铨蔡颖谦
- 关键词：葡萄球菌蛋白A胶体金原子力显微镜分子构象神经系统
- 骨髓源性干细胞:神经修复的新热点被引量：2
- 2005年
- 邓镇姜晓丹徐如祥
- 关键词：骨髓干细胞神经修复
- 原子力显微镜技术在生物医学领域的应用被引量：8
- 2005年
- 原子力显微镜(AFM)是目前最新的生物成像技术之一。它具有分辨率高,制样简单,并可在多种环境条件下以原子分辨率三维成像的特点。目前AFM主要应用于生物的核酸、蛋白质、细胞和微生物纳米水平的结构与功能研究。我们相信AFM必将在生物医学研究中起到越来越重要的作用。
- 蔡颖谦徐如祥姜晓丹
- 关键词：核酸蛋白质细胞
- 培养大鼠皮层神经元NMDA受体蛋白单分子原子力显微镜定位研究被引量：2
- 2004年
- 为在纳米尺度对 NMDA受体蛋白分子进行神经细胞膜表面原位定位和探讨原子力显微镜在生物单分子操纵和调控中的应用 ,本研究应用原子力显微镜分别对分布在云母表面的膜 NMDA受体蛋白分子标记物抗 NMDAR1Ig G-葡萄球菌蛋白 A-胶体金复合物分子和结合标记物分子后的神经元膜进行扫描 ,三维形貌测定 ,通过颗粒度分析结果 ,明确标记物分子的特征性三维形貌 ,对比确定经过免疫胶体金结合后的 NMDA受体蛋白单分子在神经元膜表面的定位。结果显示 ,空白云母表面标记物分子为分散均匀的平均粒径为 49nm的球形颗粒 ,在神经元膜表面结合 NMDA目的受体蛋白分子后 ,免疫复合物分子呈现出粒径为 5 3 nm的散在分布球形或短棒状颗粒 ,长径约为宽径的 2倍 ,长轴截面可见典型的双峰三维结构。上述结果表明 ,NMDA受体蛋白单分子可以结合 1个或 1个以上的胶体金标记物分子 ;原子力显微镜可以在纳米尺度对神经元膜 NMDA受体蛋白进行标记和其免疫复合物的三维形貌测定。胶体金颗粒标记 ,原子力显微镜测定是免疫细胞化学新方法。
- 徐如祥郁毅刚姜晓丹柯以铨
- 关键词：NMDA受体膜蛋白原子力显微镜神经细胞
