广东省自然科学基金(021221)
- 作品数：6 被引量：53H指数：4
- 相关作者：黄东阳刘戈飞宋旭红王桂玲梁斌更多>>
- 相关机构：汕头大学中国医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与细胞内定位被引量：8
- 2004年
- 应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase／reductase,NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材料,分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实,人肝脏NRDR具有视黄醛还原酶活性,在辅酶Ⅱ存在条件下其催化视黄醛还原成视黄醇的Km值和Vmax值分别(2.8±0.24)μM和(0.468±0.036)μmol／(min·mg)。构建删除和不删除羧基端过氧化物酶体定位信号SRL序列的NRDR绿色荧光蛋白报告基因表达载体。转染HeLa细胞后,应用免疫荧光双染色的方法分析NRDR细胞内定位。结果表明NRDR定位在细胞内过氧化物酶体。羧基端SRL序列对NRDR定位到过氧化物酶体是必需的,删除SRL序列的NRDR分布在细胞质中。因此,人肝脏NRDR是存在于过氧化物酶体中的辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶。
- 刘戈飞黄东阳杜晶崔泽实宋今丹
- 关键词：全反式视黄酸肝脏细胞活性
- 兔肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶在大肠杆菌中的表达及其对维生素K3的还原作用和产物的鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:检测兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶(NDRR)对维生素K3的催化活性并对该酶还原K3所生成的产物进行鉴定。方法:构建含6×His标签的兔NDRR的表达菌株,诱导表达并超声裂解后,通过Ni2+亲和层析纯化得到重组兔NDRR。在相对去氧隔绝空气反应体系以及存在高浓度十二烷基磺酸钠的反应条件下,利用高效液相色谱(HPLC)对兔NDRR还原K3的催化活性进行酶动力学研究。利用化学合成,HPLC及荧光光谱扫描对其还原产物进行鉴定。结果:诱导表达后的细菌裂解上清液经一步亲和层析后得到单一酶蛋白,其对K3的比活性分别是原空白菌裂解上清液和经诱导表达后的菌裂解上清液的比活性的18.6和7.3倍。经过HPLC测定,兔NDRR对K3的Km值为30.7,Vmax0.046μmoL/(min.mg)。利用四氢硼酸钠与K3化学合成的产物进行HPLC分析,其保留时间与酶反应所产生的产物峰保留时间一致,而且反应后短时间内能利用荧光光谱扫描得到K4相应的光谱图。结论:兔NDRR对K3存在还原活性,并生成K4。
- 肖李锋刘戈飞宋旭红谢健平张巧霞李蕊黄东阳
- 关键词：维生素K3维生素K4高效液相色谱
- 从动物组织提取高质量总RNA方法的改进被引量：25
- 2003年
- RNA提取技术是分子生物学研究中的重要实验技术。介绍一种高纯度、高产量的从动物组织中提取总RNA 的改进的方法,该法实用性强、重复性好。提取的RNA无DNA等污染物,其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表 达研究的需要。利用改进后的方法提取牛组织的总RNA,研究了NRDR基因在牛组织中的表达分布。
- 王桂玲刘戈飞黄东阳
- 关键词：RNA提取动物组织分子生物学纯度
- 一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析被引量：11
- 2005年
- 背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。
- 李一凡刘戈飞宋旭红杜昆黄东阳
- 关键词：选择性剪接
- 维甲酸衍生物对肿瘤细胞的凋亡诱导作用被引量：12
- 2006年
- 维甲酸及衍生物的抗肿瘤作用已在白血病及多种实体肿瘤的临床治疗及实验室研究中显示出其诱人前景。其中,较引人注目的是一系列新的维甲酸衍生物,如CD437,ST1926,MM002等。这些新发现的维甲酸衍生物较目前临床应用较广的全反式维甲酸(ARTA)有更强的凋亡诱导作用,更低的细胞毒性和更理想的药物代谢动力学指标,诱导凋亡途径也不同于传统维甲酸类药物作用依赖p53激活的途径。其作用的分子机制也完全有别于目前已知的化疗药物,可诱导对维甲酸和其它多种化疗药物耐药的肿瘤细胞发生凋亡。该文对目前维甲酸衍生物在肿瘤细胞中的凋亡诱导作用研究作一综述。
- 梁斌宋旭红黄东阳
- 关键词：维甲酸衍生物肿瘤凋亡
- 一种新的短链脱氢/还原酶家族新成员:NADP(H)-依赖的视黄醇脱氢酶基因的克隆和分析被引量：1
- 2004年
- 从牛的肝脏中快速抽提总RNA ,根据GenBank已发表NADP(H) 依赖的视黄醇脱氢酶基因 (NRDR)的cDNA序列 ,设计并合成特异引物 ,利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法和反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,得到牛肝内的NRDRcDNA的全长序列。经测序证实 ,牛肝NRDR的全长cDNA序列为 12 6 6bp ,其开放读码框架在 2 4～ 80 6bp ,编码 2 6 0个氨基酸 (GenBank登录号 :AF4 874 5 4 )。根据NRDR基因推导出的氨基酸序列与人、鼠、兔有高度同源性 ,并含有SDR超家族成员的两个高度保守的模序 ,在其C 端含有过氧化物酶体的靶向序列为SHL。结果表明 ,牛的NRDR应属于过氧化物酶体内SDR超家族成员并在维甲酸合成的限速步骤起作用的酶 ,也为维甲酸合成的传统通路提供一个补充。
- 王桂玲黄东阳
