国家科技支撑计划(2006BAD01A1203)
- 作品数：9 被引量：94H指数：6
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- 相关机构：上海海洋大学上海水产大学中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- 不同盐度下“吉丽”罗非鱼(尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂)NKCC1a mRNA的组织特异性表达被引量：8
- 2011年
- 应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),以"吉丽"罗非鱼[尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,♀)×萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron,♂)]为材料,研究NKCC1a基因表达的盐度组织特异性。研究结果表明:(1)NKCC1a基因mRNA表达量存在显著的组织特异性,在低于25盐度环境中,NKCC1a mRNA在鳃、肝、肾及肠中均有表达;当盐度从0提高到48时,表达量在鳃中与盐度变化呈高度正相关(R>0.9,P<0.01),在肠和肾中与盐度变化呈负相关(R≈0.7,P<0.05),但在肝中则不受盐度变化的影响。(2)当盐度提高到64,NKCC1a基因mRNA表达量在鳃和肠3 h后达最高值,5 h后下降,前后变化差异显著(P<0.05);表达量在肝中则是在5 h后达最高值,变化差异也显著(P<0.05);表达量在肾中持续下降,但差异不显著。以上结果揭示,在盐度高于25的环境中,"吉丽"罗非鱼主要由鳃组织的NKCC1a排出多余的离子以维持鱼体的水盐平衡,由此认为鳃组织在"吉丽"罗非鱼高渗透压调节中起最主要作用。
- 王兵范武江李思发
- 关键词：罗非鱼组织特异性盐度
- 尼罗罗非鱼、萨罗罗非鱼及其杂交子代的催乳素Ⅰ基因克隆及序列分析被引量：2
- 2010年
- 本研究采用RT-PCR方法对生长快、耐盐性弱的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus),耐盐性强、生长慢的萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron)以及生长与耐盐均较优的杂交子代(O.niloticus♀×S.melanotheron♂)的催乳素PRLI基因cDNA序列片段进行了克隆与序列分析,以探讨罗非鱼耐盐性的分子机制,分析和筛选与耐盐性相关的基因。主要结果:(1)序列克隆及ClustalX1.83分析表明克隆所得cDNA序列长度为339bp,编码112个氨基酸。(2)3种罗非鱼PRLI的cDNA具有高度的保守性,核苷酸序列同源性介于97.94%～99.71%之间,氨基酸序列同源性均在99.11%以上,表明罗非鱼的PRLI基因具有高度保守性。(3)杂交子代同尼罗罗非鱼的cDNA序列相比有5个碱基的变异,变异比例为1.47%;同萨罗罗非鱼相比有1个碱基的变异,变异比例为0.30%。(4)尼罗罗非鱼推导氨基酸序列中第80位氨基酸残基为脯氨酸残基(P),而杂交子代和萨罗罗非鱼在该位点均为丝氨酸残基(S)。(5)MEGA4系统进化树分析显示,杂交子代同萨罗罗非鱼聚为1支。结果(3)、(4)、(5)表明,在PRLI基因的表达方面,杂交子代同父本萨罗罗非鱼的关系较近。
- 孟庆辉李思发范武江王兵
- 关键词：罗非鱼耐盐性
- 尼罗罗非鱼与萨罗罗非鱼正反杂交后代耐盐性能的杂种优势及其与遗传的相关性的SSR分析被引量：36
- 2008年
- 对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)♀×萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron)♂(F2)、萨罗罗非鱼♀×尼罗罗非鱼♂(F2)、尼罗罗非鱼、萨罗罗非鱼4个遗传型群体的耐盐性实验表明:(1)4个遗传型群体的平均成活时间(MST)、50%成活时间(ST50)以及96h半数致死浓度(MLS-96)由高到低依次为:萨罗、萨罗×尼罗(F2)、尼罗×萨罗(F2)、尼罗,死亡率与盐度具有显著的回归关系(P<0.05);(2)两个杂交种超越尼罗的超亲杂种优势值(HN)表现为正值,超越萨罗的超亲杂种优势值(HS)表现为负值,说明它们的耐盐力都超过了尼罗,但都未超过萨罗;(3)尼罗×萨罗(F2)的平均杂种优势值(HM)表现为负值,萨罗×尼罗(F2)的HM除其MLS-96表现为负值,其MST和ST50均为正值,说明萨罗×尼罗(F2)的耐盐性能略优于尼罗×萨罗(F2)。对尼罗×萨罗(F2)、萨罗×尼罗(F2)、尼罗×萨罗(F1)、萨罗×尼罗(F1)、尼罗、萨罗6个遗传型群体的SSR分析发现:(1)有效等位基因数(Ne)、平均遗传杂合度(He)及多态信息含量(PIC)3项指标一致,表明F1遗传多样性比亲本增强2/3左右,这与杂交种的基因重组有关;F2又比F1增强1/10左右,初步认为这与F2的遗传分化有关;(2)引物Os-64和Os-75仅在尼罗、尼罗×萨罗(F1)及尼罗×萨罗(F2)中扩增出条带,表现出强烈的尼罗母系遗传;引物Os-25和IGF仅在萨罗、萨罗×尼罗(F1)及萨罗×尼罗(F2)中扩增出条带,表现出强烈的萨罗母系遗传,这4条引物可作为判别杂交鱼母本来源的遗传标记。
- 李思发颜标蔡完其李腾云荚金华张艳红
- 关键词：尼罗罗非鱼耐盐杂种优势SSR
- 尼罗罗非鱼、萨罗罗非鱼及其杂交子代胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰb)基因3′cDNA末端克隆及序列分析被引量：1
- 2010年
- 为探讨尼罗罗非鱼、萨罗罗非鱼及其杂交子代(Oreochromis niloticus ♀× Sarotherodon melanotheron ♂)IGF-Ⅰ基因结构差异,研究IGF-Ⅰ基因与此3种基因型罗非鱼耐盐性能差异之间的关系,通过3′-RACE的方法,从鳃的总RNA分别获得其IGF-Ⅰb基因的部分cDNA序列,长度分别为1076bp、1075bp和1079bp,包含完整的开放阅读框(ORF)546bp、一个终止密码及含polyA信号的3′UTR;ORF编码182个氨基酸,包括信号肽(44aa),成熟肽B区(29aa)、C区(10aa)、A区(21aa)、D区(8aa)及编码70aa的E区,二级结构为混合类型;与其他脊椎动物IGF-Ⅰb序列的序列相似度达75.8%～100%;成熟肽A、B区高度保守,C区第82位后缺失2aa,E区第131位和159位分别缺失3aa和1aa;萨罗罗非鱼在E133位发生Ala/Pro氨基酸残基替换,与耐盐性强的莫桑比克罗非鱼和画眉罗非鱼一致,推测IGF-Ⅰb基因E区选择性剪切与3种罗非鱼耐盐性能差异有关。
- 范武江李思发王兵孟庆辉
- 关键词：尼罗罗非鱼杂交子代
- 萨罗罗非鱼NKCC1α基因cDNA克隆及mRNA组织表达差异被引量：4
- 2010年
- 在鱼类适应盐度变化的过程中,鱼鳃是进行渗透调节的主要器官,NKCC1α基因是保持鳃丝氯细胞渗透平衡的关键离子转运器,以1Na+:1K+:2Cl–的比例进行电中性转运。萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanothern)是耐盐强的广盐性鱼类之一。该文通过快速扩增cDNA末端的方法,首次从萨罗罗非鱼鳃丝组织中分离出NKCC1α基因cDNA全长序列,其开放阅读框(ORF)包含1151个氨基酸残基。多重比对和聚类分析结果表明,该试验获得的基因序列与莫桑比克罗非鱼、鲑及鳗鲡的NKCC1α最为相似,其中萨罗罗非鱼与莫桑比克罗非鱼相似性最高(99%)。预测萨罗罗非鱼NKCC1α蛋白质二级结构包含10个跨膜螺旋,这些跨膜螺旋的氨基酸序列及其布局都非常保守;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测鳃、肝、肠、肾NKCC1α mRNA相对含量,这4种组织间差异显著;盐度显著影响NKCC1α在鳃组织中的表达,在136盐度下NKCC1α mRNA相对表达水平为0盐度下的4.9倍,差异极显著(P<0.001),显示NKCC1α基因与萨罗罗非鱼的耐盐性能密切相关。
- 范武江李思发
- 关键词：耐盐QRT-PCR
- 尼罗罗非鱼与萨罗罗非鱼回交子代遗传变异的微卫星分析被引量：15
- 2008年
- 用6对微卫星引物对尼罗罗非鱼、萨罗罗非鱼及其正反杂交鱼的正反回交子代共6种遗传型（genotype）罗非鱼进行了遗传变异分析，探讨回交的遗传效应。结果表明：（1）6对引物均有较好的多态性，可用于这6种罗非鱼的遗传变异分析；（2）6个微卫星位点在6种鱼中的平均杂合度为0．562～0．731，其中正回交鱼萨尼×尼罗最高（0．731），原始亲本尼罗最低（0．562）；多态信息含量为0．510～0．685，也是萨尼×尼罗最高（0．685），尼罗（0．510）最低；有效等位基因范围是2．71～3．85，也是萨尼×尼罗（3．85）最高，原始亲本尼罗最低（2．71）。（3）两种反回交子代的Nei’s遗传距离都与亲本尼罗接近，采用UPGMA和NJ法构建的聚类图表明，回交种与原始母本尼罗罗非鱼为一组，原始父本萨罗罗非鱼为另一组。萨尼×尼罗群体内遗传变异水平最高，是最有育种潜力的回交种；母本尼罗对回交子代的遗传影响大于父本萨罗，回交子代表现了一定的母本效应。
- 李腾云李思发
- 关键词：尼罗罗非鱼回交微卫星
- 耐盐罗非鱼育种回交效应评估被引量：8
- 2009年
- 对罗非鱼2种回交子代、2种正反交子代（回交鱼的母本）、2种原始种（回交鱼的祖父、母本）,共6种遗传型的生长特性、耐盐特性及遗传特征进行了研究。结果表明：（1）在盐度15、20及25时,2种回交子代的日均增重率皆比母本提高了30%~45%,差异显著（P=0.023）。（2）SSR分析发现,2种回交子代接受尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）的遗传特征带分别为87.5%和79.2%,接受萨罗罗非鱼（Sarotherodon melanotheron）的分别为35.2%和41.2%;而2种正反杂交子代接受尼罗罗非鱼的分别为66.7%和41.7%,接受萨罗罗非鱼的分别为47.1%和88.2%。（3）回交子代与原始亲本尼罗罗非鱼的遗传距离较近,同正反交子代相比,回交子代生长性能有所进步,耐盐性能基本保持,扩增的特异性条带数目较少,表明遗传多样性走低和基因型纯合性走强的趋势。（4）两种回交子代间有一定差异,萨尼♀[萨罗罗非鱼♀×尼罗罗非鱼♂（F2）]×尼罗罗非鱼♂生长快5%,有效等位基因数、平均杂合度、多态信息含量等遗传指标较高,是优选的对象。
- 刘于信李思发蔡完其李腾云莢金华张艳红
- 关键词：尼罗罗非鱼杂交子代回交子代SSR
- 尼罗罗非鱼与萨罗罗非鱼正反交鱼自繁后代F2耐盐性、生长性能及亲本对杂种优势贡献力的评估被引量：50
- 2008年
- 为选育耐盐和生长兼优的罗非鱼，以原始亲本尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）和萨罗罗非鱼（Sarotherodon melanotheron）为对照，正交鱼（尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂）自繁第二代（F2）和反交鱼（萨罗罗非鱼♀×尼罗罗非鱼♂）自繁第二代（F2）为试验对象，观察和比较他们在盐度为0、15、20及25时的耐盐性和生长性能，并估算杂种优势及亲本的贡献力。结果如下：（1）盐度20-25是正、反交鱼的适宜生长盐度，他们在这一盐度范围里的日均增重率为尼罗罗非鱼在盐度0下的75％左右、萨罗罗非鱼在盐度25下的4倍左右，表明杂交后代的生长速度比较接近尼罗罗非鱼，远优于萨罗罗非鱼。在盐度25下，正交鱼比反交鱼生长快7％左右。（2）在盐度15与20下，生长速度和体重变异系数的杂种优势较明显，未发现不同盐度会导致正反交鱼成活率有显著变化。（3）不同亲本鱼类的强势性状，如尼罗罗非鱼的快速生长、萨罗罗非鱼的高耐盐性，对杂交后代的不同性状在不同盐度中有不同的贡献力。运用F1≤a1P1＋a2P2所作的估算表明，对杂交后代在15-25盐度下的生长率，尼罗罗非鱼的杂种优势贡献力比萨罗罗非鱼的大3～4倍；对杂交后代在25盐度下的耐盐性，尼罗罗非鱼的贡献力几乎为零，而萨罗罗非鱼的贡献力几乎为100％。
- 李思发颜标蔡完其李腾云荚金华张艳红
- 关键词：尼罗罗非鱼耐盐性
- 尼罗罗非鱼和萨罗罗非鱼遗传生殖隔离的初步证据(英文)被引量：15
- 2011年
- 罗非鱼类(Tilapiini)含3个属70余种,种间和属间颇易人工杂交,但尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)和萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron)人工杂交难度大,产苗概率甚低,要获得数量足够的可用于生产的杂交子代相当困难。该文对这两种鱼及其正交(O.niloticus♀×S.melanotheron♂)和反交(S.melanotheron♀×O.niloticus♂)子代的头肾细胞的核型进行了比较。此外,采用同工酶电泳方法检测肾、肝、眼、肌肉、心中乳酸脱氢酶等4种同工酶的表型差异。4种遗传型罗非鱼具有相同的染色体二倍数(2n=44)和总臂数(NF=50),但各具不同的染色体类型,尼罗罗非鱼为3对近中着丝点染色体(sm)、12对近端着丝点染色体(st)和7对端着丝点染色体(t);萨罗罗非鱼为1对中间着丝点染色体(m)、2对sm、12对st和7对t;正反杂交子代表现为介于双亲之间的混合类型,为0.5对m、2.5对sm、12对st和7对t。在同工酶中,仅见肾脏乳酸脱氢酶电泳结果有清晰差异,尼罗罗非鱼出现5条谱带,萨罗罗非鱼3条,而杂交子代6条,且所有谱带的迁移率和活性均表现出多态性。据此初步认为,核型和同工酶方面的差异可能是导致这两种不同属罗非鱼生殖隔离的遗传原因,这些差异也可能为这两种(属)鱼的分类学提供新的遗传背景资料。
- 李思发赵岩范武江蔡完其许映芳
- 关键词：尼罗罗非鱼核型同工酶生殖隔离
