广东省自然科学基金(021202)
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 相关作者：洪岸余榕捷高媛谢秋玲周天鸿更多>>
- 相关机构：暨南大学河北医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技攻关计划广东省重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定被引量：9
- 2003年
- 目的 :利用基因工程技术 ,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌。方法 :利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原 (pro-NK)基因 ,并克隆到表达载体pET3c上 ,构建表达pro -NK和载体上 2 2氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK ;表达质粒pENK分别转化溶源化宿主菌BL2 1(DE3)pLysS-和BL2 1(DE3)pLysS+ ,获得表达菌pENK - (DE3)pLysS-和pENK - (DE3)pLysS+ 。利用SDS -PAGE和纤维蛋白平板法检测目的蛋白的表达及活性。结果 :SDS-PAGE显示两株菌株均表达 4 2kD的目的蛋白。纤维蛋白平板法显示表达产物具溶栓的活性。在pENK -(DE3)pLysS-中融合蛋白不需异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)诱导就有基础表达 ,融合蛋白的表达使表达菌细胞溶解 ,菌落中空 ,表明表达产物具细胞毒作用。结论 :本研究成功实现了在大肠杆菌表达具有溶栓活性的pro -NK融合蛋白 ,为开发纳豆激酶成为新一代溶栓药物的研究奠定基础。
- 余榕捷谢秋玲洪岸汪炬孙奋勇
- 关键词：纳豆激酶溶源性基因表达
- VPAC2在CHO细胞的表达及鉴定被引量：1
- 2006年
- PAC2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,介导多种重要生物学功能。为获得稳定特异表达VPAC2的中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary,CHO)细胞,将pcDNA-VPAC2表达载体转染CHO细胞,G418筛选转染阳性克隆,PACAP38标准品诱导阳性克隆细胞的胞内cAMP生成,筛选出对PACAP38最为敏感的阳性单克隆细胞株(VPAC2-CHO),运用RT-PCR、Westernblot和免疫荧光法检测VPAC2受体表达情况,利用VPAC2受体特异激动剂通过竞争性结合试验和促进胞内第二信使cAMP生成的活性检测实验证实,VPAC2-CHO特异表达有功能的VPAC2。Scatchard作图分析显示VPAC2-CHO的VPAC2受体密度为(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白,PACAP38与VPAC2的解离常数Kd值为(0.55±0.10)nmol/L。特异表达VPAC2受体细胞系的构建为深入研究该受体理化性质、生物学功能以及筛选、开发VPAC2受体新型特异激动剂和拮抗剂等研究奠定了基础。
- 余榕捷高媛戴云谭毅力曾志宏周天鸿洪岸
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞
- 重组环状胸腺五肽结构类似物Cyclo-(Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-)的制备、鉴定和活性检测被引量：2
- 2006年
- 为了实现蛋白内含肽(Intein)介导的重组环状胸腺五肽结构类似物[cyclo-(Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-),cTP]的高效制备,设计并合成编码6个氨基酸的cTP基因,克隆到表达载体pTWIN1,重组表达质粒pTW-cTp转化E.coliER2566构建工程菌,IPTG诱导由几丁质结合域纯化标签(chitinbindingdomain,CBD)、2个蛋白内含肽和目的多肽组成的“多元”融合蛋白(CBD-intein1-cTP-intein2-CBD)的高效表达.几丁质柱亲合层析纯化融合蛋白后,改变pH值和温度诱导intein1C端切割,硫醇MESNA诱导intein2N端切割,释放N端为Cys,C端为硫酯的重组cTP线性前体,通过非保护多肽硫酯环合法实现环肽生成.激光飞行质谱结果显示,纯化产物的分子量为764·4,与环肽的理论值相符.免疫活性检测结果显示,环肽cTP较线性多肽TP-5具有更显著的促进巨噬细胞吞噬能力的活性(P<0·01)和促进B细胞抗体生成的活性(P<0·01).
- 余榕捷高媛林剑谢秋玲谭毅力洪岸周天鸿
- 提高Xa因子酶切效率的策略被引量：5
- 2004年
- 为提高Xa因子对融合蛋白CBD IGF和CBD PACAP的酶切效率 ,以便高效释放非融合的重组多肽 ,利用基因工程技术在两个融合蛋白中Xa因子识别位点 (Ile Glu Gly Arg↓ )前均引入 7个氨基酸组成的富含甘氨酸柔性短肽 (Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly)。纤维素亲和层析纯化各个融合蛋白 ,比较Xa因子对引入短肽前、后融合蛋白的酶切效率。比较结果表明 :短肽的引入不同程度地提高了融合蛋白CBD IGF和CBD PACAP对Xa因子的敏感性 ;但总体上CBD IGF对Xa因子的敏感性比CBD PACAP低。此研究结果提供了一种提高Xa因子酶切效率的策略。
- 余榕捷高媛洪岸
- 关键词：XA因子短肽融合蛋白IGF酶切氨基酸组成
