湖北省教育厅重点项目(B200524009)
- 作品数：3 被引量：30H指数：2
- 相关作者：涂明利刘先军卢进昌杜春玲徐永健更多>>
- 相关机构：华中科技大学太和医院十堰市太和医院更多>>
- 发文基金：湖北省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- A549细胞条件培养液激活PI3K-Akt1信号通路促人脐静脉内皮细胞存活被引量：1
- 2010年
- 目的:研究肺癌A549细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endo-thelial cells,HUVECs)生存活性和凋亡的影响,以及PI3K-Akt信号通路在其中的作用。方法:用制备获得的人肺癌A549细胞CM培养HUVECs;XTT法检测HUVECs活性;Hoechst33258染色,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变;FCM法检测细胞的凋亡率;Western印迹法检测Akt总蛋白和磷酸化Akt蛋白表达。分别用特异性PI3K抑制剂wortmannin(WT)和针对Akt1基因的siRNA(siAkt1)转染HUVECs,RT-PCR法检测Akt亚型mRNA的表达,并观察上述各指标的变化。结果:在CM刺激后24h,HUVECs活性明显增强(P=0.037),凋亡率下降(P=0.001)。CM呈时间依赖性激活HUVECsAkt磷酸化,CM处理后15min即显示磷酸化Akt水平增高,30min达高峰,此后呈下降趋势。WT或siAkt1转染均能阻断前述效应。结论:肺癌A549细胞CM经PI3K-Akt途径促进HUVECs存活并抑制其凋亡,其中Akt1起关键作用。
- 涂明利熊畅刘先军罗国仕杜春玲徐永健
- 关键词：内皮细胞信号转导
- 苦参碱和MAPK/ERK信号通路在抑制肺癌细胞诱导人脐静脉内皮细胞增殖和迁移中的作用被引量：27
- 2009年
- 背景与目的苦参碱是中国传统中药槐根的主要生物碱成分之一,具有抗炎、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化和凋亡等作用。丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(Motigen-activated proteinkinase/extracelluar regulated protein kinase,MAPK/ERK)级联通路是血管内皮细胞信号转导的重要途径。本研究目的是探讨苦参碱(Matrine,Mat)和MAPK/ERK信号转导通路在抑制肺腺癌A549细胞条件培养基(A549human lung cancer cells conditioned medium,A549CM)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical veins endothelial cells,HUVECs)增殖和迁移中的作用。方法应用Mat与MAPK/ERK特异性抑制剂PD98059(PD)处理A549CM培养的HUVECs,采用细胞计数、划痕损伤实验和Western Blot技术,观察Mat、PD98059对A549CM诱导的人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及磷酸化ERK(p-ERK)表达的影响。结果干预后24h,与对照组相比,A549CM显著促进HUVECs增殖、迁移及p-ERK的表达。与A549CM组相比,Mat能明显抑制A549CM诱导的HUVECs增殖和迁移及p-ERK的表达;PD98059可以抑制HUVECs增殖及p-ERK表达,而对迁移没有作用。结论Mat和PD98059均能有效抑制A549CM诱导的HUVECs增殖和p-ERK表达,Mat还能抑制A549CM诱导的HUVECs迁移,而PD98059对A549CM诱导的HUVECs迁移没有影响,提示抑制MAPK/ERK信号传导通路可能是苦参碱抗肺癌血管生成的部分机制。
- 卢进昌罗强程萍刘先军白明涂明利
- 关键词：苦参碱细胞外信号调节激酶
- 靶向siRNA沉默Akt1基因表达及其对肺癌培养基促内皮细胞迁移的抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的:研究小干扰RNA(siRNA)对血管内皮细胞Akt1基因表达的沉默作用及其对肺癌A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞为靶细胞,设计针对Akt1基因mRNA的siRNA(siAkt1),利用阳离子脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞,采用半定量PCR技术(RT-PCR)检测Akt1mRNA的表达,用Western blotting技术检测Akt总蛋白表达。同时用体外"伤口愈合"实验观察细胞迁移。结果:筛选出的siAkt1能显著抑制内皮细胞Akt1mRNA(P<0.01)和Akt总蛋白的表达(P<0.05),A549细胞条件培养基显著促进人脐静脉内皮细胞迁移(P<0.05),但对转染siAkt1的人脐静脉内皮细胞迁移没有促进作用(P>0.05)。结论:特异性siRNA通过有效抑制Akt1基因的表达而抑制A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的作用,这为肺癌血管生成干预治疗提供了新的理论基础。
- 涂明利徐永健卢进昌冯静波刘先军熊畅蒋飞杜春玲唐以军
- 关键词：肺癌RNA干扰内皮细胞迁移
