国家自然科学基金(30760229)
- 作品数：10 被引量：27H指数：4
- 相关作者：马海梅陈洁陈璐丁剑冰马秀敏更多>>
- 相关机构：新疆医科大学新疆医科大学第一附属医院新疆畜牧科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划新疆维吾尔自治区高校科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乌鲁木齐在校大学生面部蠕形螨感染及相关因素分析
- 2010年
- 目的了解乌鲁木齐在校大学生面部蠕形螨感染情况及其致病因素,为改善大学生蠕形螨感染情况提供依据。方法用透明胶带粘贴法,对乌鲁木齐市593名在校大学生面部蠕形螨感染情况进行流行病学调查,并对其致病性及致病因素进行分析。结果大学生蠕形螨感染率高达39.0%。人体蠕形螨与酒渣鼻、痤疮等多种皮肤病有关,而且与一定的外部因素,包括性别、民族、饮食习惯、生活习惯、个人卫生习惯,日常生活用品共用情况等有重要联系。
- 玛依拉·吐尔逊王月黎文君吾拉木·马木提
- 关键词：螨感染面部
- 定量PCR研究细粒棘球蚴抗氧化相关基因的差异表达被引量：1
- 2010年
- 目的在已构建的氧化胁迫下细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)与正常组织差异表达的消减cDNA文库中,筛选细粒棘球蚴在抗氧化过程中差异表达的重要基因。方法将前期研究中应用抑制性消减杂交技术(suppression subtrac-tive hybridization,SSH)构建氧化胁迫下细粒棘球蚴差异表达基因的消减cDNA文库进行蓝白斑筛选和菌落PCR分析后测序分析。测序结果利用BLAST在线软件与GenBank数据库进行同源序列比对分析和BlastX分析。从文库中随机挑选4个未知新序列和抗氧化密切相关的TPx基因片段,利用定量PCR法研究氧化胁迫下,差异表达基因片段在mRNA水平上的变化情况。结果整个文库克隆测序结果获得重要基因的cDNA序列,如氧化还原酶、蛋白激酶、生长因子等。另有部分克隆在GenBank中无法查到对应的同源基因,可能代表了新基因。定量PCR结果显示:S88、H32-1两个基因在0.8mmol/LH2O2氧化胁迫的原头蚴中表达量分别上调为未经氧化胁迫原头蚴中的2.0和2.3倍,TPx基因片段当H2O2浓度大于0.8mmol/L时,其表达量增高。结论上述基因的上调表达很可能与细粒棘球蚴在抗氧化过程中的相关功能有密切的联系,可以作为研究细粒棘球蚴抗氧化的候选基因。
- 侯秋莲张富春张文宝吾拉木.马木提张壮志
- 关键词：细粒棘球蚴氧化胁迫抑制性消减杂交荧光定量PCR基因差异表达
- 细粒棘球绦虫抗原EgAgB8／1和EgAgB8／3亚单位基因在虫体发育过程中的阶段性表达被引量：12
- 2009年
- 目的研究细粒棘球绦虫抗原B(EgAgB)8 ku 1和3亚单位基因家族成员(EgAgB8/1、EgAgB8/3)在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原。方法分别从细粒棘球绦虫成虫、虫卵、原头蚴和棘球蚴生发层提取总RNA,用Avian Myelo-blastosis Virus Reverse Transcriptase XL反转录成cDNA,根据EgAgB8/1和EgAgB8/3序列设计跨越内含子的基因特异性引物。基因表达差异应用SYBR GreenⅠreal-time PCR进行定量分析,并用内参对照基因actinⅡ来标准化定量结果。结果Real-time PCR检测显示,EgAgB8/1在棘球蚴生发层大量表达,SQ/Actin=68.874;EgAgB8/3在成虫阶段大量表达,SQ/Actin=1 905.512。结论EgAgB 2个亚单位基因的表达在虫体发育各个阶段显现出明显差异。提示EgAgB8/1可作为包虫感染中间宿主免疫学诊断最佳候选目的抗原,而EgAgB8/3可作为包虫感染终末宿主免疫学诊断的靶抗原。EgAgB 2个亚单位基因的阶段差异表达可能与其虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关。
- 张海涛马秀敏吾拉木·马木提马海梅贾海英曹春宝丁剑冰温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫荧光定量PCR
- 细粒棘球绦虫AgB8/1-AgB8/2重组嵌合抗原表达系统的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达。方法从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgB8/1和EgAgB8/2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此两条基因片段为依据,人工合成EgAgB8/1-EgAgB8/2嵌合抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm-T载体,测序鉴定其正确性。通过对pUCm-T/AgB8/1-AgB8/2重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确后,转化至E.coliBL21(DE3)Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgB8/1-AgB8/2重组嵌合蛋白。用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平。结果测序表明,AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒。SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组嵌合蛋白得到成功表达,在相对分子量约38 kD处有表达条带。结论成功构建了pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达质粒,并初步诱导表达出AgB8/1-AgB8/2嵌合重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。
- 古力帕丽.麦曼提依明马海梅吾拉木.马木提陈洁陈璐丁剑冰马秀敏温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫原核表达质粒
- 细粒棘球绦虫EgAgB8/1重组抗原和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合抗原的表达及血清学诊断价值的比较被引量：1
- 2011年
- 目的诱导表达并纯化细粒棘球绦虫EgAgB8/1重组抗原和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合抗原,比较两个重组蛋白对囊型包虫病(CE)的血清学诊断价值。方法 IPTG诱导转染至E.coliBL21(DE3)LysS的pET32a-EgAgB8/1和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2重组原核表达质粒,表达和纯化EgAgB8/1重组蛋白和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白,用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白,并通过超声裂解法进行纯化,以CE病人及囊虫病人血清为一抗,Western blot法检测两个重组蛋白免疫反应性。结果细粒棘球绦虫重组抗原pET32a-EgAgB8/1和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2重组原核表达质粒得到成功诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析,重组蛋白分子质量单位为28 ku和38 ku;Western blot结果表明,EgAgB8/1重组蛋白和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白均能被CE病人血清特异性识别,16份CE病人血清中,以EgAgB8/1重组蛋白为抗原时11份阳性,以EgAgB8/1-EgAgB8/2重组蛋白为抗原时13份阳性;用EgAgB8/1和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组蛋白检测12份囊虫病人血清,分别有5份和3份阳性。结论 EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白具有抗原特异性,对囊型包虫病的血清学诊断价值优于EgAgB8/1重组蛋白。
- 古力帕丽.麦曼提依明马海梅吾拉木.马木提陈洁陈璐丁剑冰马秀敏
- 关键词：细粒棘球绦虫血清学诊断
- 用EgAgB8/3重组蛋白ELISA-双抗夹心法建立棘球绦虫感染犬粪抗原检测系统的研究被引量：11
- 2011年
- 目的高纯度表达细粒棘球绦虫抗原B(EgAgB8/3)重组蛋白,制备抗EgAgB8/3重组蛋白的多克隆抗体,建立ELISA-双抗夹心法检测棘球绦虫感染犬粪EgAgB8/3天然抗原系统。方法对已构建好的pET32a-EgAgB8/3-E.coli BL21(DE3)Lys S原核细胞表达系统进行IPTG诱导重组蛋白表达,用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平。目的蛋白用His-Binding-resin纯化柱进行纯化并免疫动物,免疫血清总IgG采用硫酸铵沉淀法纯化,一部分总IgG用过碘酸钠法进行标记,另一部分作为固相载体结合抗体备用。以未标记的总IgG为ELSA-双抗夹心法的包被抗体,细粒棘球绦虫感染犬粪粗提蛋白为夹心抗原,以标记的IgG为最终底物。结果成功获得高纯度EgAgB8/3重组蛋白和高效价多克隆抗体,运用标记和非标记IgG建立的ELSA-双抗夹心法对棘球绦虫感染犬粪特异性抗原检测的敏感性和特异性分别为85.0%和95.7%。结论获得的EgAgB8/3重组蛋白具有较好的免疫原性,且免疫动物后制备的多克隆抗体具有较高的敏感性和特异性。用EgAgB8/3重组蛋白EL-SA-双抗夹心法粪抗原检测系统的成功建立为棘球绦虫感染犬快速诊断试剂盒的制备提供了科学依据,此方法的稳定性和推广实用性将需用大量的流行病学调查资料进一步证实。
- 陈洁马海梅古力帕丽.麦曼提依明陈璐丁剑冰吾拉木.马木提
- 关键词：棘球绦虫多克隆抗体
- 细粒棘球绦虫AgB8/1重组抗原表达系统的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建pET32a-AgB8/1原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达。方法从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板用基因特异性引物扩增EgAgB8/1基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此基因片段为依据,人工合成合成EgAgB8/1抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm-T载体,测序鉴定其正确性。通过对pUCm-T/AgB8/1重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8/1抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确性后,转化至E.coli BL21(DE3)Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgB8/1重组蛋白。用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平。结果测序表明,AgB8/1抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒。SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组蛋白得到成功表达,在相对分子量约28 kDa处有表达条带。结论本研究成功构建了pET32a-AgB8/1原核表达质粒,并初步诱导表达出AgB8/1重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。
- 古力帕丽.麦曼提依明马海梅陈洁陈璐吾拉木.马木提
- 关键词：细粒棘球绦虫原核表达质粒
- 犬感染细粒棘球绦虫的诊断研究进展及展望被引量：6
- 2011年
- 棘球蚴病（echinococcosis）又称包虫病（hydatiddisease）,是由棘球属绦虫的幼虫寄生于人、畜体内引起的一种严重危害人体健康和畜牧业发展的人畜共患病之一。能感染人类的棘球属绦虫有4种：细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus,Eg）、
- 陈洁吾拉木.马木提
- 关键词：细粒棘球绦虫人畜共患病畜牧业发展棘球蚴病
- 细粒棘球绦虫抗原B8kDa亚单位在虫体发育过程中的阶段性表达研究被引量：4
- 2011年
- 目的研究细粒棘球绦虫抗原B(EgAgB)8 kDa亚单位基因家族成员(EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5)在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原。方法分别从细粒棘球绦虫成虫、虫卵、原头蚴和棘球蚴生发层提取总RNA,用Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase XL(TaKaRa,Japan)反转录成cDNA,根据EgAgB 5个亚单位(EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5)序列设计跨越内含子的基因特异性引物。基因表达差异应用SYBR Green I荧光实时定量PCR(Real-ti me PCR)技术进行定量分析,并用内参对照基因actin II来标准化定量结果。结果荧光实时定量PCR结果分析,EgAgB8/1和EgAgB8/2在棘球蚴生发层大量表达(表达量为68.874和16.258),EgAgB8/3和EgAgB8/5在成虫阶段有大量表达(表达量分别为1 905.512和180.315),EgAgB8/4在成虫、虫卵和原头蚴中的表达量分别为0.001、0.088和0.102,均较棘球蚴生发层表达量(3.576)低。结论 EgAgB 5个亚单位的基因表达在虫体发育各个阶段显现出明显差异。EgAgB8/1和EgAgB8/2可作为包虫感染中间宿主免疫学诊断最佳候选目的抗原,而EgAgB8/3可作为包虫感染终末宿主免疫学诊断的靶抗原。EgAgB 5个亚单位的阶段差异表达可能与其虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关,有待进一步研究。
- 张海涛陈璐马海梅马秀敏吾拉木.马木提
- 关键词：细粒棘球绦虫抗原B荧光定量PCR
- 新疆细粒棘球蚴免疫诊断抗原B亚单位3基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 目的确定细粒棘球蚴抗原B亚单位3(EgAgB8/3)的特性并为研究其免疫功能奠定基础。方法根据已报道的编码EgAgB8/3的基因序列(AF362442)设计引物,进行基因扩增,利用DNAstarProtean软件对该抗原进行分析。结果成功克隆到EgAgB8/3基因,扩增片段为207 bp;序列比对结果显示,新疆细粒棘球蚴EgAgB8/3基因与GenBank登录号为AF362442序列完全一致,同源性为100%。对该抗原分析认为具有潜在的抗原表位位点。结论细粒棘球蚴EgAgB8/3在对包虫病的免疫诊断上是较好的候选抗原,并为研究该蛋白的免疫功能及建立以EgAgB8/3抗原为主的包虫病终末宿主免疫诊断方法奠定了基础。
- 马海梅陈洁古力帕丽.麦曼提依明陈璐丁剑冰吾拉木.马木提
- 关键词：细粒棘球蚴
