国家自然科学基金(30760287)
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
- 相关作者：田长富赵瑜徐天勇张华堂张芳更多>>
- 相关机构：昆明医科大学昆明医学院中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省科技计划项目云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备被引量：1
- 2013年
- 目的优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Me)t的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1:128,间接Elisa法测效价1:1×105.结果成功表达纯化出纯度大于90%的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化.
- 张芳任晓丽罗得华罗沈强王文举张华堂田长富
- 蛋氨酸补偿代谢途径及蛋氨酸酶抗肿瘤研究进展被引量：5
- 2013年
- 蛋氨酸是唯一1种含硫必需氨基酸,是蛋白合成和细胞转甲基化作用的必需成分,同时也是同型半胱氨酸的前体物质.研究发现,与正常细胞相比,肿瘤细胞对蛋氨酸呈现出依赖的特性.这种依赖是一种代谢缺陷,可从蛋氨酸的生物代谢角度解释肿瘤细胞产生蛋氨酸依赖的缺陷.正常细胞代谢中存在蛋氨酸补救途径即5,-甲硫基腺苷酸(MTA)循环合成蛋氨酸,而肿瘤细胞却无此途径,表现出对蛋氨酸的绝对需要.L-蛋氨酸γ-裂解酶能够特异性地裂解L-蛋氨酸产生氨、α-丁酮酸和甲硫醇.蛋氨酸酶在抗肿瘤研究中表现出对肿瘤特异性高,毒副作用小等特点,有较好的发展前景,给肿瘤基因治疗开辟了新的路径.
- 曾红静田长富
- 关键词：蛋氨酸肿瘤治疗
- 蛋氨酸酶肿瘤治疗的研究进展被引量：2
- 2011年
- 肿瘤细胞蛋氨酸依赖性的增高是一种特异性的代谢缺陷,这种代谢缺陷也是选择性治疗肿瘤的一个靶点。研究发现,蛋氨酸γ-裂解酶(蛋氨酸酶、L-Methionine-γLyase)可以特异地裂解细胞内外的蛋氨酸,从而强烈地抑制肿瘤细胞的生长,并诱发其凋亡,但对正常细胞无影响,从而发挥抗肿瘤的作用。现在还发现,蛋氨酸酶消除体内的蛋氨酸,能够导致基因的甲基化作用和DNA合成发生改变,以增强抗肿瘤效果。动物研究和临床试验表明,蛋氨酸酶可以消除多种依赖蛋氨酸的肿瘤细胞,因此是一种蛋氨酸限制抗癌策略。蛋氨酸酶显示出作为一种新型的基因治疗方法的巨大前景。本文特对此做一综述。
- 付崴田长富
- 关键词：蛋氨酸基因治疗代谢缺陷
- 邻苯二甲醛柱前衍生化法快速高效测定液体生物样品L-蛋氨酸含量被引量：4
- 2014年
- 目的 拟建立一种快速、简单、灵敏的血浆等生物样品中L-蛋氨酸的含量测定方法.方法 用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生化法分离并定量C57小鼠血浆中L-蛋氨酸,采用反向色谱柱ODS （4.6 mm×250 mm）;pH 7.2 10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4（PB）含0.2％ THF和PB-甲醇-乙腈（50：35：15）为流动相梯度洗脱;紫外检测器340 nm检测.结果 邻苯二甲醛柱前衍生化法的最低检出限浓度为0.5 μmol/L,8 min内分离测定了血浆L-蛋氨酸的含量,12 min内血浆所有氨基酸全部洗脱;在0.5-100 μmol/L进样浓度范围内,L-蛋氨酸的峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数0.999 8,对于L-蛋氨酸的标准加入回收率在94.63％和97.99％之间.结论 邻苯二甲醛柱前衍生化法是一种快速简便的紫外检测液体生物样品中L-蛋氨酸含量的方法.
- 霍文艳张钰文徐天勇吴怡田长富张华堂
- 关键词：蛋氨酸邻苯二甲醛紫外检测
- 重组蛋氨酸裂解酶原核体系的表达及纯化被引量：1
- 2012年
- 目的建立L-蛋氨酸γ-裂解酶的原核表达、纯化体系.方法合成Metase基因并构建重组质粒pBSK-Metase.通过分子克隆技术,构建重组表达质粒pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase,并将重组子转化到感受态大肠杆菌Dh5α中.pGEX-4T-1-Metase经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导;pBV220-Metase经42℃温度诱导;并对诱导条件进行优化,获得大量表达;建立蛋氨酸裂解酶纯化体系.结果构建出Metase基因的两种高效原核表达体系pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase,并优化各自的最佳诱导表达条件;建立重组蛋氨酸裂解酶的纯化体系.结论成功建立重组蛋氨酸裂解酶的原核表达、纯化体系;获得高效原核表达重组子pGEX-4T-1-Metase,且获得纯度高达95%的蛋氨酸酶.
- 胡振良张芳田腊梅任晓丽田长富
- 关键词：纯化
- 蛋氨酸酶联合顺铂协同抑制人肺腺癌细胞GLC生长作用被引量：3
- 2014年
- 目的纯化重组蛋氨酸酶并探讨其联合化疗药物顺铂对人肺腺癌GLC细胞生长的协同抑制效应.方法对原核表达体系pGEX-4T-1-Met/Dh5a菌液破碎后上清过纯化柱(GST)纯化后,采用MTT比色法测定重组蛋氨酸酶与顺铂联合应用对GLC细胞增殖的抑制作用,采用金正均法计算q值判断两药合用是否具有协同作用.结果重组蛋氨酸裂解酶浓度为0.22 mg/mL,纯度达95%,活性为0.568 IU/mg.给药72 h后单用顺铂对GLC细胞抑制率为24.80%,单用蛋氨酸酶抑制率为27.49%,两药合用抑制率为66.80%.q=1.47>1.15,表现出明显协同作用.结论蛋氨酸酶及顺铂均有抑制GLC增殖作用,并且两者联合使用存在协同作用.
- 胡月新徐天勇张钰雯赵瑜田长富
- 关键词：顺铂肺腺癌细胞
- 肿瘤基因治疗的病毒载体研究进展被引量：8
- 2014年
- 肿瘤基因治疗是通过载体将遗传物质转移入宿主细胞,使肿瘤细胞凋亡,包括原发瘤和转移瘤。目前,应用于肿瘤基因治疗的载体分为病毒载体和非病毒载体,病毒载体的转移效率高,其中腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、反转录病毒载体和疱疹病毒载体等已广泛应用于基础研究和临床试验。
- 宋向明赵瑜田长富
- 关键词：肿瘤基因治疗病毒
