浙江省大学生科技成果推广项目(14080131380912)
- 作品数：2 被引量：3H指数：2
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- 毕赤酵母高密度发酵表达血管紧张素转化酶C-结构域被引量：2
- 2010年
- 血管紧张素转化酶(ACE,EC3.4.15.1)在调节血压方面具有重要作用。研究证实,ACE的C结构域(ACE-C)是使血管紧张素I(AngI)分解的主要活性位点。在5L发酵罐中,对重组毕赤酵母表达ACEC-结构域的发酵工艺进行优化,探讨温度、pH、甲醇浓度等主要因素对重组蛋白表达量和酶活力的影响。结果表明,当工业培养基添加2%蛋白胨为氮源时,ACEC-结构域的降解现象得到了有效控制;采用诱导温度为26℃,pH5.5,甲醇含量为1.5%的表达条件,ACEC-结构域表达量和酶活力分别达到446mg/L和38.2U/ml,比活力达到86U/mg,是Sigma公司ACE标准品比活力的2倍,为大规模制备ACEC-结构域蛋白,筛选专一性更强的ACEC-结构域抑制剂奠定了基础。
- 徐珏许传莲杜方尧
- 关键词：毕赤酵母ACE蛋白降解
- 人源血管紧张素转化酶-C结构域在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2010年
- 血管紧张素转化酶(ACE,EC3.4.15.1)在调节血压方面具有重要作用,研究证实,ACE-C结构域是体内使血管紧张素I(AngI)分解的主要活性位点。PCR扩增ACE-C结构域基因片段,克隆至分泌表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母GS115,阳性克隆再次电转,用G418筛选高拷贝的酵母菌落进行表达条件优化,获得0.5g/L的蛋白表达量及7.178U/mL的酶活力。经Ni+亲和层析纯化,获得纯度大于97%的目的蛋白。Captopril对酶的抑制试验证明ACE-C结构域可望成为新一代抗高血压药物ACE抑制剂筛选的理想酶靶。
- 赵钰岚徐珏许传莲
- 关键词：血管紧张素转化酶催化结构域毕赤酵母卡托普利
